[发明专利]一种黄曲霉毒素B1的制备方法

摘要

本发明公开了一种黄曲霉毒素B1的制备方法，将接种培养后的菌种3.6156置于发酵培养基中进行培养，再用提取液提取AFB1，然后将含有AFB1的提取液减压浓缩，所得浓缩液经处理后得黄曲霉毒素B1（AFB1），在霉菌培养箱内通过变温培养，提高了真菌毒素产量，达到0.53%，采用含有甲酸的乙酸乙酯、乙腈混合提取液，提取彻底并稳定，通过氮气吹干AFB1结晶产品纯度提高到98.0%以上。

主权项

一种黄曲霉毒素B1的制备方法，其特征在于：将接种培养后的寄生曲霉3.6156置于发酵培养基中进行培养，再用提取液提取黄曲霉毒素B1，然后将含有黄曲霉毒素B1的提取液减压浓缩，所得浓缩液经处理后得黄曲霉毒素B1；所述制备方法包括发酵培养基的制备步骤：发酵培养基包括花生壳、花生渣、蔗糖、麸皮、尿素和水，先将尿素和蔗糖溶解在水中，然后加入花生壳、花生渣和麸皮，搅拌均匀，高温高压灭菌；还包括接种培养步骤：取4℃保藏的寄生曲霉3.6156放置至室温，无菌操作接种到PDA液体培养基；将接种后的PDA培养基放置到摇床培养，温度控制在30℃，转速160转/分钟，培养时间3天；还包括发酵接种步骤：将接种培养后的菌种全部转移到发酵培养基，搅拌均匀；还包括发酵步骤：将含有菌种的发酵培养基放置在霉菌培养箱，在30℃下培养3天，降低温度到26℃培养3天，再降低温度到22℃继续培养10天；还包括灭菌步骤：将经发酵步骤后的发酵培养基经100℃高压灭菌30min；还包括提取步骤：将乙酸乙酯、乙腈和甲酸按照体积比799:200:1混匀为混合提取液；分两次取混合提取液并置于灭菌后的发酵培养基，振荡摇匀，过滤收集后离心，3000转/分离心20分钟，收集上清液；合并两次上清液；还包括浓缩净化步骤：将上清液减压浓缩到50±2mL/1000mL上清液，将C18粉、PSA粉、氨丙基粉和无水硫酸镁，与浓缩液混合后振荡涡混1分钟，10000转/分离心后上层清液过0.22µm的滤膜净化过滤；每50±2mL浓缩液用C18粉0.5g、PSA粉0.5g、氨丙基粉1g和无水硫酸镁15g。