[发明专利]一种黄曲霉毒素B1的制备方法

权利要求书

1.一种黄曲霉毒素B₁的制备方法，其特征在于：将接种培养后的寄生曲霉3.6156置于发酵培养基中进行培养，再用提取液提取黄曲霉毒素B₁，然后将含有黄曲霉毒素B₁的提取液减压浓缩，所得浓缩液经处理后得黄曲霉毒素B₁；

所述制备方法包括发酵培养基的制备步骤：

发酵培养基包括花生壳、花生渣、蔗糖、麸皮、尿素和水，先将尿素和蔗糖溶解在水中，然后加入花生壳、花生渣和麸皮，搅拌均匀，高温高压灭菌；

还包括接种培养步骤：

取4℃保藏的寄生曲霉3.6156放置至室温，无菌操作接种到PDA液体培养基；

将接种后的PDA培养基放置到摇床培养，温度控制在30℃，转速160转/分钟，培养时间3天；

还包括发酵接种步骤：

将接种培养后的菌种全部转移到发酵培养基，搅拌均匀；

还包括发酵步骤：

将含有菌种的发酵培养基放置在霉菌培养箱，在30℃下培养3天，降低温度到26℃培养3天，再降低温度到22℃继续培养10天；

还包括灭菌步骤：

将经发酵步骤后的发酵培养基经100℃高压灭菌30min；

还包括提取步骤：

将乙酸乙酯、乙腈和甲酸按照体积比799:200:1混匀为混合提取液；

分两次取混合提取液并置于灭菌后的发酵培养基，振荡摇匀，过滤收集后离心，3000转/分离心20分钟，收集上清液；合并两次上清液；

还包括浓缩净化步骤：

将上清液减压浓缩到50±2mL/1000mL上清液，将C18粉、PSA粉、氨丙基粉和无水硫酸镁，与浓缩液混合后振荡涡混1分钟，10000转/分离心后上层清液过0.22µm的滤膜净化过滤；

每50±2mL浓缩液用C18粉0.5g、PSA粉0.5g、氨丙基粉1g和无水硫酸镁15g。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述制备方法还包括将浓缩净化步骤过滤后的净化液转移至洁净试管，30℃水浴氮气吹干。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述花生壳、花生渣、蔗糖、麸皮、尿素和水的重量份比25：42：2：22：1：8。