[发明专利]一种检测血液循环肿瘤细胞的试剂盒

摘要

本发明的技术方案是一种利用MGB探针结合荧光定量聚合酶链式反应法对肺癌患者外周血进行上皮细胞粘附分子表达检测，以反映体内循环肿瘤细胞水平,其方法是把需检测的目的标本,通过RNA提取、cDNA逆转录，后利用MGB探针进行荧光定量聚合酶链式扩增反应，后经荧光定量聚合酶链式扩增反应仪检测荧光强度，得到上皮粘附分子表达水平。本发明具有高灵敏度、高特异度的优点,同时又继承了一般聚合酶链式反应法高通量的优点,提高了检测效率,降低了检测成本。

主权项

一种荧光定量聚合酶链式反应检测外周血循环肿瘤细胞水平的方法， 该方法利用MGB探针结合荧光定量聚合酶链式反应进行上皮细胞粘附分子表达检测，得到上皮粘附分子表达水平，用以检测肺癌患者体内循环肿瘤细胞，其特征在于，所述上皮细胞粘附分子表达检测流程包括以下步骤：1）在非小细胞肺癌患者肘正中静脉处采取外周血液2mL，将血液保存于EDTA抗凝血管中，并放置在4℃冰箱内存储；2）以300G离心10分钟，弃去上层血浆，保留血细胞层；3）利用红细胞裂解液去除血细胞中的红细胞，保留其中有核细胞，在‑80℃冰箱中保存；4）将经上述处理的样本加入Trizol液提取总RNA；5）将总RNA经过逆转录反应得到相应的cDNA样本；6）制备EpCAM，利用Qrt‑PCR绝对定量法进行EpCAM表达水平检测，并以健康志愿者标本为阴性对照。