[发明专利]一种人脐带间充质干细胞的培养方法有效
申请号: | 201510191059.8 | 申请日: | 2015-04-21 |
公开(公告)号: | CN104762258B | 公开(公告)日: | 2017-12-26 |
发明(设计)人: | 王一飞;陈海佳;葛啸虎;麦锦连;马岩岩;王小燕 | 申请(专利权)人: | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 |
主分类号: | C12N5/0775 | 分类号: | C12N5/0775 |
代理公司: | 北京集佳知识产权代理有限公司11227 | 代理人: | 赵青朵 |
地址: | 510000 广东省广州市国*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | 本发明涉及干细胞领域,公开了一种脐带间充质干细胞的培养方法。本发明所述脐带间充质干细胞的培养方法,取脐带去除最外层膜及静脉跟动脉,剪碎后加入完全培养基,于37℃,5%CO2静止培养,期间补加完全培养基,待组织块有细胞爬出后去掉组织块,清洗后加入完全培养基,待细胞集落成片生长后,传代培养。本发明所述培养方法操作简单、安全有效。实验表明,与现有方法相比,本发明所述脐带间充质干细胞的培养方法原代时间短,增殖后获得细胞更多,细胞活力和增殖能力强,培养至P15代后仍然保持良好的增殖能力,且能很好保持脐带间充质干细胞的形态和良好的干细胞特性,适用于脐带间充质干细胞的大量培养。 | ||
搜索关键词: | 一种 脐带 间充质 干细胞 培养 方法 | ||
【主权项】:
一种人脐带间充质干细胞的培养方法,取脐带去除最外层膜及静脉跟动脉,剪碎后加入完全培养基,于37℃,5%CO2静止培养,期间补加完全培养基,待组织块有细胞爬出后去掉组织块,清洗后加入完全培养基,待细胞集落成片生长后,传代培养;所述完全培养基配方为lonzaUltraCULTURE MEDIUM无血清培养基+10v/v%PALL血清替代物+1v/v%200mM L‑谷氨酰胺+1×NEAA+5~50ng/mL EGF;所述培养前完全培养基的加入量为0.07mL/cm2‑0.1mL/cm2;所述清洗后完全培养基的加入量为0.15mL/cm2‑0.21mL/cm2;所述传代培养为去掉细胞培养上清,清洗后加入含胰酶和EDTA的消化液消化,用完全培养基终止消化,离心,弃上清,用完全培养基重悬后,传代。
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