[发明专利]一种人脐带间充质干细胞的培养方法有效
| 申请号： | 201510191059.8 | 申请日： | 2015-04-21 |
| 公开（公告）号： | CN104762258B | 公开（公告）日： | 2017-12-26 |
| 发明（设计）人： | 王一飞;陈海佳;葛啸虎;麦锦连;马岩岩;王小燕 | 申请（专利权）人： | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司11227 | 代理人： | 赵青朵 |
| 地址： | 510000 广东省广州市国*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 脐带 间充质 干细胞 培养 方法 | ||
1.一种人脐带间充质干细胞的培养方法，取脐带去除最外层膜及静脉跟动脉，剪碎后加入完全培养基，于37℃，5％CO2静止培养，期间补加完全培养基，待组织块有细胞爬出后去掉组织块，清洗后加入完全培养基，待细胞集落成片生长后，传代培养；所述完全培养基配方为lonzaUltraCULTURE MEDIUM无血清培养基+10v/v％PALL血清替代物+1v/v％200mM L-谷氨酰胺+1×NEAA+5～50ng/mL EGF；所述培养前完全培养基的加入量为0.07mL/cm2-0.1mL/cm2；所述清洗后完全培养基的加入量为0.15mL/cm2-0.21mL/cm2；所述传代培养为去掉细胞培养上清，清洗后加入含胰酶和EDTA的消化液消化，用完全培养基终止消化，离心，弃上清，用完全培养基重悬后，传代。
2.根据权利要求1所述的培养方法，所述传代培养中含胰酶和EDTA的消化液的加入量为0.015mL/cm2-0.04mL/cm2。
3.根据权利要求1所述的培养方法，所述传代培养中含胰酶和EDTA的消化液中胰酶浓度为0.05％-0.3％，EDTA浓度为0.01％-0.04％。
4.根据权利要求1所述的培养方法，所述传代培养中消化液消化的时间为1-3min。
5.根据权利要求1所述的培养方法，所述传代培养中所述离心为200g-400g离心5min。
6.根据权利要求1所述的培养方法，所述传代密度为8000个细胞/cm2-15000个细胞/cm2。
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