[发明专利]一种制备GGTA1和iGb3S双基因敲除的非人哺乳动物的方法及应用在审
| 申请号： | 201510122581.0 | 申请日： | 2015-03-19 |
| 公开（公告）号： | CN104894163A | 公开（公告）日： | 2015-09-09 |
| 发明（设计）人： | 徐丽明;邵安良;范昌发 | 申请（专利权）人： | 中国食品药品检定研究院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/54;C12N5/10;A01K67/027;G01N33/53 |
| 代理公司： | 北京元中知识产权代理有限责任公司 11223 | 代理人： | 王明霞 |
| 地址： | 100050*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及制作基因敲除动物模型的领域，具体讲，涉及一种制备GGTA1和iGb3S双基因敲除的非人哺乳动物的方法及应用。其制备方法为：分别构建打靶载体；将打靶载体转入到胚胎细胞，将重组胚胎细胞注入代孕动物胚胎中，移植到假孕动物体内，与正常动物交配；对得到的嵌合体动物进行基因型验证，筛选基因成功敲除的阳性基因敲除的嵌合体动物；进一步与野生型动物交配，获得F1代杂合子；F1代杂合子之间交配后获得两条染色体均被剔出的GGTA1和iGb3S纯合子动物；再将GGTA1和iGb3S纯合子动物进行交配，筛选GGTA1和iGb3S同时缺失的双基因敲除纯合子动物，并建系获得基因敲除动物种群。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 制备 ggta1 igb3s 基因 非人 哺乳动物 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种制备GGTA1和iGb3S双基因敲除的非人哺乳动物的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)构建打靶载体：分别从基因组DNA中分离GGTA1和iGb3S基因，经长链PCR方法扩增获得同源臂，与抗生素耐药基因复合构建GGTA1打靶载体和iGb3S打靶载体；(2)将GGTA1打靶载体转入到胚胎细胞，将重组胚胎细胞注入代孕动物胚胎中，移植到假孕动物体内，与正常动物交配；对得到的嵌合体动物进行基因型验证，筛选基因成功敲除的阳性基因敲除的嵌合体动物；进一步与野生型动物交配，获得GGTA1的F1代杂合子；(3)将iGB3S打靶载体转入到胚胎细胞，将重组胚胎细胞注入代孕动物胚胎中，移植到假孕动物体内，与正常动物交配；对得到的嵌合体动物进行基因型验证，筛选基因成功敲除的阳性基因敲除的嵌合体动物；进一步与野生型动物交配，获得iGB3S的F1代杂合子；(4)将GGTA1的F1代杂合子和iGB3S的F1代杂合子之间交配后获得两条染色体均被剔出的GGTA1和iGb3S纯合子动物；(5)再将GGTA1和iGB3S纯合子动物进行交配，筛选GGTA1和iGb3S同时缺失的双基因敲除纯合子动物，并建系获得基因敲除动物种群。
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