[发明专利]构建无选择标记的自主发光脓肿分枝杆菌的方法及建立相应体外高通量筛药模型有效
| 申请号： | 201510104936.3 | 申请日： | 2015-03-10 |
| 公开（公告）号： | CN104762312B | 公开（公告）日： | 2018-08-07 |
| 发明（设计）人： | 张天宇;曹元元;伍甜;谭守勇;谭耀驹;蔡杏珊;刘春平 | 申请（专利权）人： | 中国科学院广州生物医药与健康研究院;安徽大学;广州市胸科医院 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N15/53;C12N1/21;C12R1/32 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 郑莹 |
| 地址： | 510530 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了构建无选择标记的自主发光脓肿分枝杆菌的方法及建立相应体外高通量筛药模型。在该构建过程中，关键是重组质粒pOPAI1B的构建，pOPAI1B中含有发光所需酶基因LuxCDABE，抗性筛选基因Apr和整合酶基因Int的融合基因，位于融合基因两端的同向重复序列DifR和DifL，以及噬菌体整合位点attP和复制子。重组质粒pOPAI1B转入脓肿分枝杆菌中经过筛选获得抗性基因和整合酶基因均丢失的无抗性筛选标记的自主发光脓肿分枝杆菌。本发明构建的自主发光脓肿分枝杆菌可以高通量筛选药物，通过检测细菌发光情况判定药物的杀菌或抑菌效果，可用于体外药物活性检测，不需要任何底物，可连续检测同一样品，灵敏度高，重复性强。 | ||
| 搜索关键词： | 构建 选择 标记 自主 发光 脓肿 分枝杆菌 方法 建立 相应 体外 通量 模型 | ||
【主权项】：
1.一种转化脓肿分枝杆菌的重组质粒pOPAI1B，其特征在于：该重组质粒pOPAI1B按逆时针方向依次含有启动子，发光所需酶基因LuxCDABE，抗性筛选基因Apr和整合酶基因Int的融合基因，位于融合基因两端的同向重复序列DifR和DifL，以及噬菌体整合位点attP和复制子；所述噬菌体整合酶Int为分枝杆菌噬菌体Tweety的整合酶Int，其序列如SEQ ID NO:6所示；所述的噬菌体整合位点attP为分枝杆菌噬菌体Tweety的attP位点，其序列如SEQ ID NO:4所示；所述的抗性筛选基因为安普霉素抗性基因Apr，其序列如SEQ ID NO:1所示。
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