[发明专利]利用Runx2和小分子化合物诱导人成纤维细胞重编程为成骨细胞的方法有效
| 申请号： | 201510099327.3 | 申请日： | 2015-03-06 |
| 公开（公告）号： | CN104762324B | 公开（公告）日： | 2017-12-15 |
| 发明（设计）人： | 胡敏;李燕皎 | 申请（专利权）人： | 昆明学院 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/12;C12N5/10;C12N5/077 |
| 代理公司： | 昆明今威专利商标代理有限公司53115 | 代理人： | 赛晓刚 |
| 地址： | 650214 云南省昆明市*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用Runx2和小分子化合物诱导人成纤维细胞重编程成骨细胞的方法，特别是一种利用Runx2基因表达及小分子化合物CHIR99021和/或小分子化合物forskolin，在地塞米松存在的条件下诱导人成纤维细胞转分化为成骨细胞的方法，属细胞生物学与组织工程领域。它包括构建携带Runx2‑GFP的慢病毒浸染人皮肤成纤维细胞，之后利用小分子化合物5～10μMCHIR99021和10μMforskolin在地塞米松的存在的条件下，进行人成纤维细胞的转分化，7～１５天以后，更换成骨细胞诱导液进行诱导，5～20天后可将其诱导为成骨细胞的方法。本发明可以简单快速地获得成骨细胞，用于骨代谢性疾病，骨折等的细胞治疗。本发明的药物组合也可用于组织工程骨的研发和生产。为基础研究带来便捷，为临床应用带来前景。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 runx2 分子 化合物 诱导 纤维 细胞 编程 方法 | ||
【主权项】：
一种利用Runx2和小分子化合物诱导人成纤维细胞重编程为成骨细胞的方法，其特征是：利用Runx2基因的表达及小分子化合物诱导人成纤维细胞转分化为成骨细胞；所述小分子化合物为forskolin，或CHIR99021和forskolin的混合物；所述方法先构建携带 Runx2‑GFP的慢病毒浸染人皮肤成纤维细胞，使正常人皮肤成纤维细胞表达 Runx2，将病毒浸染后的皮肤成纤维细胞放置在普通培养液中培养3～7天后，更换为激素信号分子诱导液再培养7～15天，随后利用成骨细胞分化液进行诱导，5～7天后可诱导为成骨细胞；所述激素信号分子诱导液是在普通培养液中加入6μM～12μM的小分子化合物forskolin + 5～15nM的地塞米松两种物质或者加入5～10μM 小分子化合物CHIR99021+ 6μM～12μM小分子化合物forskolin+ 5～15nM地塞米松三种物质组成的。
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