[发明专利]适于多重PCR反应的南瓜SSR标记引物及其应用

摘要

本发明公开了三组适于多重PCR反应的南瓜SSR标记引物，属于植物分子生物学DNA标记技术领域，本发明还公开了所述引物在南瓜品种鉴定上的应用及一种南瓜品种鉴定方法。本发明利用南瓜转录组测序结果，开发了一批南瓜SSR标记，从这些标记中选择出3个多态性高、带型好、扩增产物大小差异在50bp左右、引物之间不能相互配对和形成发卡结构SSR位点，通过对PCR反应体系和扩增程序的优化，建立了3个SSR位点的多重PCR分析技术体系。该SSR标记的多重PCR扩增带型好、多态性高、结果易读，显著提高了SSR的分析效率，可以用于南瓜品种鉴定、指纹图谱构建和杂种纯度鉴定等领域。

主权项

一种南瓜品种鉴定方法，其特征在于包括以下步骤：1)提取南瓜样品的DNA；2)用南瓜SSR标记引物对提取的DNA进行PCR扩增；3)用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测步骤2)的扩增产物；4)根据扩增产物带型组合的差异对南瓜品种进行鉴定，步骤2)中所述的南瓜SSR标记引物共有三组，适于多重PCR反应，所述引物分别为：第一组引物，其正向引物序列如SEQ ID NO:1所示，反向引物序列如SEQ ID NO:2所示；第二组引物，其正向引物序列如SEQ ID NO:3所示，反向引物序列如SEQ ID NO:4所示；第三组引物，其正向引物序列如SEQ ID NO:5所示，反向引物序列如SEQ ID NO:6所示，步骤2)中的PCR扩增体系为：总体积25μL，含有1×buffer，2.4μM MgCL2，240μM dNTPs，0.6U Taq酶，三组引物的正、反向引物各0.16μM，30ng DNA，步骤2)中的PCR扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性1min，58℃退火1min，72℃延伸1min 30s，34个循环；72℃延伸10min；4℃保存。