[发明专利]适于多重PCR反应的南瓜SSR标记引物及其应用有效
| 申请号： | 201510087268.8 | 申请日： | 2015-02-25 |
| 公开（公告）号： | CN104694642B | 公开（公告）日： | 2018-01-05 |
| 发明（设计）人： | 别之龙;孔秋生;刘勇;孙士涛;刘朋 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 武汉开元知识产权代理有限公司42104 | 代理人： | 徐绍新 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 适于 多重 pcr 反应 南瓜 ssr 标记 引物 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种南瓜品种鉴定方法，其特征在于包括以下步骤：
1)提取南瓜样品的DNA；
2)用南瓜SSR标记引物对提取的DNA进行PCR扩增；
3)用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测步骤2)的扩增产物；
4)根据扩增产物带型组合的差异对南瓜品种进行鉴定，
步骤2)中所述的南瓜SSR标记引物共有三组，适于多重PCR反应，所述引物分别为：
第一组引物，其正向引物序列如SEQ ID NO:1所示，反向引物序列如SEQ ID NO:2所示；
第二组引物，其正向引物序列如SEQ ID NO:3所示，反向引物序列如SEQ ID NO:4所示；
第三组引物，其正向引物序列如SEQ ID NO:5所示，反向引物序列如SEQ ID NO:6所示，
步骤2)中的PCR扩增体系为：总体积25μL，含有1×buffer，2.4μM MgCL2，240μM dNTPs，0.6U Taq酶，三组引物的正、反向引物各0.16μM，30ng DNA，
步骤2)中的PCR扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性1min，58℃退火1min，72℃延伸1min 30s，34个循环；72℃延伸10min；4℃保存。
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