[发明专利]检测PIK3CA基因H点突变的PCR-RFLP方法有效
| 申请号： | 201510062759.7 | 申请日： | 2015-02-06 |
| 公开（公告）号： | CN104593515A | 公开（公告）日： | 2015-05-06 |
| 发明（设计）人： | 方瑾;李婉明;周婷婷;冯一鸣 | 申请（专利权）人： | 中国医科大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 沈阳智龙专利事务所(普通合伙) 21115 | 代理人： | 宋铁军 |
| 地址： | 110122 辽宁省沈阳市沈北*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用于检测PIK3CA基因H1047R位点突变的PCR-RFLP方法。该方法针对PIK3CA基因第20密码子的H1047R突变位点，设计一对特异性引物，引入FstⅠ酶切位点，建立PCR-RFLP方法。方法的主要步骤是（1）提取待检样品的基因组DNA；（2）PCR扩增包含H1047R突变位点的PIK3CA基因片段；（3）以PIK3CA基因片段为模板进行FstⅠ限制性内切酶反应；（4）凝胶电泳获得限制性片段长度多态性图谱；（5）根据限制性片段的长度和数量确定待检样品的PIK3CA基因突变状态。方法具有操作简单、特异性强、灵敏度高、成本低的优点，可用于高效检测PIK3CA基因突变状态。 | ||
| 搜索关键词： | 检测 pik3ca 基因 突变 pcr rflp 方法 | ||
【主权项】：
一种检测PIK3CA基因H1047R位点突变的PCR‑RFLP方法，其特征在于包含以下步骤：（1）提取待检样品的基因组DNA（2）PIK3CA基因的PCR扩增以提取的基因组DNA为模板，使用上游引物5’‑GGAGTATTTCATGAAACAA ATGAATGATGCG‑3’和下游引物5’‑GAGCTTTCATTTTCTCAGTTATCTT‑3’，进行PCR扩增，得到126bp扩增产物，同时引入FstⅠ酶切位点；（3）FstⅠ酶切反应以扩增得到的126bp产物为模板，使用FstⅠ内切酶进行酶切反应；（4）电泳检测酶切片段采用琼脂糖凝胶电泳方法分离酶切片段，获得限制性片段长度多态性图谱；（5）突变状态结果判定根据限制性片段的长度和数量确定待检样品的PIK3CA基因突变状态，电泳图谱在96bp和30bp位置呈现两条带者判定为PIK3CA基因野生型；电泳图谱中在126bp处呈现一条带者判定为突变型。
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