[发明专利]一种猪脂肪干细胞的分离培养方法

摘要

本发明公开了一种猪脂肪干细胞的分离培养方法，包括:抽取猪皮下脂肪组织，将脂肪组织使用含双抗的PBS缓冲液洗涤，在脂肪组织中加入Ⅰ型胶原酶消化液消化后获得猪脂肪干细胞，再使用含有EGF的无血清培养基培养；本发明在猪脂肪干细胞分离培养中，能够减少脂肪组织来源中血液等杂质对酶解脂肪的影响，缩短I型胶原酶酶解脂肪时间、使用无血清培养基培养原代细胞，培养基中添加合适的生长因子，能够更好地分离培养猪脂肪干细胞，保持较强的增殖生长能力，从而建立一套规范标准的猪脂肪干细胞原代分离培养的方法。

主权项

一种猪脂肪干细胞的分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤:(1)抽取猪皮下脂肪组织后，将脂肪组织与含双抗的PBS缓冲液混匀，静置5～10分钟，脂肪组织与PBS缓冲液分层；吸去下层PBS缓冲液与血液的混合液体，再加入含双抗的PBS缓冲液重复清洗；(2)将清洗后的脂肪组织剪碎，去除结缔组织，再加入含双抗的PBS缓冲液混匀后，500g～700g离心3～5分钟，去除上层油脂与下层的PBS及血液，留下中层的脂肪组织；所述含双抗的PBS缓冲液为含青霉素和链霉素的PBS缓冲液；(3)在脂肪组织中加入Ⅰ型胶原酶消化液，震荡条件下消化45～75min；(4)消化后，立即以1000rpm～1500rpm离心5～10min，离心后，沉淀部分即为猪脂肪干细胞；(5)将猪脂肪干细胞用完全培养基中培养；所述完全培养基为含有EGF的无血清培养基，EGF的浓度为10ng/ml。