[发明专利]一种复染环境下细胞DNA定量测量方法

摘要

本发明提供了一种复染环境下细胞DNA定量测量方法，包括将载有脱落细胞的玻片用多种单一纯染料分别染色；对未放入玻片的多光谱成像系统先进行多光谱成像，获得入射光强度的光谱图像，再依次插入纯染料染色的玻片获取光谱图像，计算出染料的吸光度；测量出所有染料的吸光度图像，计算得到模型M＝(XtX)‑1Xt；用复染染料染色后的待分析细胞，用多光谱成像系统测出吸收光谱图像，然后用模型M和公式c＝My计算出细胞上各种染料的相对浓度，用和细胞DNA含量成正比的福尔根染料浓度计算出细胞的DNA相对含量。本发明可以剥离福尔根染色和巴氏染色，可以同时进行细胞DNA定量和细胞形态定量分析。

主权项

一种复染环境下细胞DNA定量测量方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：步骤a、将载有脱落细胞的玻片用多种单一纯染料分别染色；步骤b、对未放入染色玻片的多光谱成像系统先进行多光谱成像，获得入射光强度的光谱图像Io(λ)，其中λ为光波长；步骤c、再依次插入纯染料染色的玻片获取光谱图像I(λ)，据此计算出染料的吸光度xi(λ)＝log(Io(λ)/I(λ))；步骤d、重复步骤c，测量出所有染料的吸光度图像xi(λ)，然后综合成敏感度矩阵X，X＝[x1，x2，……xn]；其中，i＝1–n,n为染料的总数；步骤e、计算得到模型M＝(XtX)‑1Xt；其中，X代表矩阵，Xt代表将该矩阵转置，X‑1代表将该矩阵求逆；步骤f、用步骤a中的所有染料一起复染待分析细胞，将载有染好的待分析细胞的玻片置于显微镜下，用多光谱成像系统测出它的吸收光谱图像y(λ)，y＝[y1,y2,……yn]，然后依据公式c＝My计算出染料的相对浓度，c＝(c1,c2,c3,……cn)，为染料待测量的浓度；染色前细胞核内DNA经稀酸水解后产生具有还原作用的醛基，所述醛基与福尔根染料结合，福尔根染料的浓度正比于细胞核的DNA含量，从而根据福尔根染料的浓度计算得出细胞核内的DNA含量。