[发明专利]一种复染环境下细胞DNA定量测量方法

权利要求书

1.一种复染环境下细胞DNA定量测量方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

步骤a、将载有脱落细胞的玻片用多种单一纯染料分别染色；

步骤b、对未放入染色玻片的多光谱成像系统先进行多光谱成像，获得入射光强度的光谱图像Io(λ)，其中λ为光波长；

步骤c、再依次插入纯染料染色的玻片获取光谱图像I(λ)，据此计算出染料的吸光度x_i(λ)＝log(Io(λ)/I(λ))；

步骤d、重复步骤c，测量出所有染料的吸光度图像x_i(λ)，然后综合成敏感度矩阵X，X＝[x₁，x₂，……x_n]；其中，i＝1–n,n为染料的总数；

步骤e、计算得到模型M＝(X^tX)^-1X^t；其中，X代表矩阵，X^t代表将该矩阵转置，X^-1代表将该矩阵求逆；

步骤f、用步骤a中的所有染料一起复染待分析细胞，将载有染好的待分析细胞的玻片置于显微镜下，用多光谱成像系统测出它的吸收光谱图像y(λ)，y＝[y₁,y₂,……y_n]，然后依据公式c＝My计算出染料的相对浓度，c＝(c₁,c₂,c₃,……c_n)，为染料待测量的浓度；

染色前细胞核内DNA经稀酸水解后产生具有还原作用的醛基，所述醛基与福尔根染料结合，福尔根染料的浓度正比于细胞核的DNA含量，从而根据福尔根染料的浓度计算得出细胞核内的DNA含量。

2.如权利要求1所述的一种复染环境下细胞DNA定量测量方法，其特征在于，所述多光谱成像系统的光谱段大于或等于染料数目，以便计算出染料的相对浓度。

3.如权利要求2所述的一种复染环境下细胞DNA定量测量方法，其特征在于，所述多光谱成像系统的光谱段采用480nm-680nm的光谱段。

4.如权利要求3所述的一种复染环境下细胞DNA定量测量方法，其特征在于，在设定的光谱段的基础上，光谱图像采集间隔为10-100nm。

5.如权利要求1至4任一项所述的一种复染环境下细胞DNA定量测量方法，其特征在于，所述多光谱成像系统，包括物镜、成像镜、摄像机和计算机，在所述物镜和成像镜之间的光路上安装有电调谐滤光器。

6.如权利要求5所述的一种复染环境下细胞DNA定量测量方法，其特征在于，所述摄像机安置在成像镜的后端，并且所述摄像机的成像数据与所述计算机对接。

7.如权利要求6所述的一种复染环境下细胞DNA定量测量方法，其特征在于，还包括控制器，用以控制所述电调谐滤光器在所述物镜和所述成像镜之间的光路上的位置。

8.如权利要求7所述的一种复染环境下细胞DNA定量测量方法，其特征在于，所述控制器与所述计算机对接，并接受所述计算机的指令，进而控制所述电调谐滤光器的动作。

9.如权利要求1至4，6至8任一项所述的一种复染环境下细胞DNA定量测量方法，其特征在于，步骤a、步骤b的先后顺序可调。

10.如权利要求1至4，6至8任一项所述的一种复染环境下细胞DNA定量测量方法，其特征在于，还包括应用所述方法剥离福尔根染色和巴氏染色的步骤。