[发明专利]一种复染环境下细胞DNA定量测量方法

说明书

技术领域

本发明涉及脱落细胞涂片检查方法，尤其是涉及多光谱显微成像及细胞成分定量分析方法，属于细胞染色成像技术领域。

背景技术

宫颈癌是妇科高发的恶性肿瘤之一，对宫颈癌及癌变的早期诊断是提高宫颈癌治愈率及生存率的关键。目前我国最常用的宫颈癌筛查方法是TBS分类法，癌症早期诊断需要从上万个细胞中挑选少数几个癌变的细胞，这种方法需要医生来进行长时间人工阅片筛查，极大的增加医生的工作强度和人为误差。

用细胞DNA图像定量分析诊断方法进行宫颈癌前病变的诊断已有大量报道，在北美及欧洲细胞DNA图像定量分析诊断方法已作为一种常规临床检测方法之一。在国内，许多大城市也开始用全自动DNA定量分析系统进行宫颈癌筛查。许多研究表明，细胞DNA定量分析诊断方法在早期诊断方面具有更大优势。

目前有两种方法来结合TBS和DNA定量检查。

一种是将细胞涂片先做DNA染色，用全自动DNA图像定量分析系统进行宫颈癌筛查，找到可以得癌细胞后，将DNA染色再用化学试剂褪色，然后再做巴氏染色复染，方便医生直接复查检查出的癌细胞。缺点是操作复杂，找到的癌细胞有可能在褪色过程中脱落。

另外一种方法是做2张细胞涂片，一张巴氏染色做TBS分类，一张福尔根(Feulgen)染色应用全自动DNA定量分析系统做DNA含量测定，临床应用中可一次取材，同时制片，不同染色，两种技术同时检测，可实现优势互补，能显著提高诊断准确率。缺点是DNA定量分析系统找出的异常细胞，医生无法通过熟悉的细胞形态来进行TBS分类。医生还必须仔细重新检查另外一张巴氏染色的载玻片，搜索癌变细胞进行确认。

发明内容

本发明提出了一种复染环境下细胞DNA定量测量方法，可以同时进行细胞DNA定量和细胞形态定量分析；同时在仪器DNA定量扫描找出的癌细胞后，医生可方便的在原位进行医生熟悉的脱落细胞TBS复查。

本发明的目的通过以下技术方案来具体实现：

一种复染环境下细胞DNA定量测量方法，包括以下步骤：

步骤a、将载有脱落细胞的玻片用多种单一纯染料分别染色；

步骤b、对未放入染色玻片的多光谱成像系统先进行多光谱成像，获得入射光强度的光谱图像Io(λ)，其中λ为光波长；

步骤c、再依次插入纯染料染色的玻片获取光谱图像I(λ)，据此计算出染料的吸光度x_i(λ)＝log(Io(λ)/I(λ))；

步骤d、重复步骤c，测量出所有染料的吸光度图像x_i(λ)，然后综合成敏感度矩阵X，X＝[x₁，x₂，……x_n]，；

步骤e、计算得到模型M＝(X^tX)^-1X^t；

步骤f、用步骤a中的所有染料一起复染待分析细胞，将载有染好的待分析细胞的玻片置于显微镜下，用多光谱成像系统测出它的吸收光谱图像y(λ)，依据公式c＝My计算出染料的相对浓度，c＝(c₁,c₂,c₃,……c_n)，为染料待测量的浓度；染色前细胞核内DNA经稀酸水解后产生具有还原作用的醛基，所述醛基与福尔根染料结合，福尔根染料的浓度正比于细胞核的DNA含量，从而根据福尔根染料的浓度计算得出细胞核内的DNA含量。

所述多光谱成像系统的光谱段大于或等于染料数目，以便计算出染料的相对浓度。

所述多光谱成像系统的光谱段采用480nm-680nm的光谱段。

在设定的光谱段的基础上，光谱图像采集间隔为10-100nm。

所述多光谱成像系统，包括物镜、成像镜、摄像机和计算机，在所述物镜和成像镜之间的光路上安装有电调谐滤光器。

所述摄像机安置在成像镜的后端，并且所述摄像机的成像数据与所述计算机对接。

进一步的，所述多光谱成像系统还包括控制器，用以控制所述电调谐滤光器在所述物镜和所述成像镜之间的光路上的位置。

所述控制器与所述计算机对接，并接受所述计算机的指令，进而控制所述电调谐滤光器的动作。

用本发明提出的方法可以剥离福尔根染色和巴氏染色。可以同时进行细胞DNA定量和细胞形态定量分析；同时在仪器DNA定量扫描后找出的癌细胞，医生可方便的在原位进行医生熟悉的脱落细胞TBS复查。

附图说明