[发明专利]一种HPV检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种检测HPV的qPCR引物，该qPCR引物包括如下两类引物对：第一类引物对：能扩增出所有类型HPV基因组中保守序列的引物对；第二类引物对：能在同一管qPCR体系中检测出至少两种类型HPV的引物对。本发明还公开包含上述引物对的HPV检测试剂盒。本发明HPV检测特异性强，完全达到应用探针法qPCR的特异性水平。与传统PCR诊断相比，操作更为简单，可靠，同时可用于高通量样本检测。本发明还将双链DNA结合荧光染料qPCR检测方法应用于HPV的诊断，具备了特异性高，敏感性强和成本低的特点，为HPV的普查和宫颈癌防治提供了快速准确的分子检测方法，同时大大降低了检验成本，具有重要的推广应用价值。

主权项

1.一种HPV检测试剂盒，其特征在于，包括如下引物及试剂：第一类引物对：扩增出所有类型HPV基因组中保守序列的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1~2所示；第二类引物对：在同一管qPCR体系中检测出至少一种高危类型HPV的引物对；所述的第二类引物对包括如下引物对：(1) 扩增高危HPV 16、31、33、35、51、58、59和82型的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO：3~4所示；(2) 扩增高危HPV 18、39、45和68的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO：5~6所示；(3) 扩增高危HPV34和73型的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO：7~8所示；(4) 扩增高危HPV53、56和66型的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO：9~10所示；(5) 扩增高危HPV 26、67、69、70和85型的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO：11~12所示；(6) 扩增高危HPV 52型的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO：13~14所示；扩增阳性对照β‑actinin基因的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO：15~16所示；该试剂盒还包括如下试剂：HPV液化液、DNA提取液、qPCR缓冲液、单链DNA结合蛋白、尿嘧啶‑DNA糖基化酶、DNA聚合酶、聚合酶单克隆抗体、dNTP混合液、EvaGreen荧光染料；其中，所述qPCR缓冲液的组成如下：KCl 500mM，Triton X‑100 0.5%v/v，BSA 0.5mg/ml，MgSO₄ 7.5mM，Glycerol 17.0% v/v，(NH₄)₂SO₄ 5mM，Tris‑SO₄ 150mM，pH为9.75；所述的DNA聚合酶为耐强碱性pH的DNA聚合酶；所述的dNTP混合液为将dATP、dGTP、dCTP和dUTP按照等摩尔数混合的水溶液；所述的聚合酶单克隆抗体为与DNA聚合酶特异性结合的单克隆抗体。