[发明专利]一种HPV检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测HPV的qPCR引物，该qPCR引物包括如下两类引物对：第一类引物对：能扩增出所有类型HPV基因组中保守序列的引物对；第二类引物对：能在同一管qPCR体系中检测出至少两种类型HPV的引物对。本发明还公开包含上述引物对的HPV检测试剂盒。本发明HPV检测特异性强，完全达到应用探针法qPCR的特异性水平。与传统PCR诊断相比，操作更为简单，可靠，同时可用于高通量样本检测。本发明还将双链DNA结合荧光染料qPCR检测方法应用于HPV的诊断，具备了特异性高，敏感性强和成本低的特点，为HPV的普查和宫颈癌防治提供了快速准确的分子检测方法，同时大大降低了检验成本，具有重要的推广应用价值。

技术领域

本发明属于人乳头瘤病毒(HPV)筛查技术领域，具体涉及一种HPV检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)是一种嗜上皮性病毒，有高度的特异性，人类是它唯一的宿主。HPV对表皮和粘膜鳞状上皮具有特殊嗜性，其基因组为双链环状DNA，含有约7900对碱基(bp)，共有3个基因区组成，包括早期区(Early Region，E区)、晚期区(Late Region，L区)区和与非编码区(Uncoding Region，UCR)或上游调控区(URR)。E区按顺序为E6、E7、E1、E2、E3、E4和E5共7个基因，参与病毒DNA的复制、转录、编码病毒蛋白、维持细胞内病毒的高拷贝数的基因，其中E6和E7是HPV的主要致癌基因，与病毒细胞转化功能及致癌性有关。L区主要有衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2，L1高度保守，特异性强；L2编码的衣壳蛋白较小，但变异多。UCR含有HPV基因组DNA的复制起点和HPV基因表达所必需的调控元件，调控病毒的转录与复制。

目前已经确定HPV型别已经超过了120种，其中有50余种定向感染人体生殖道皮肤及粘膜的复层鳞状上皮，导致尖锐湿疣糜烂，甚至可能引起癌症的发生。不同亚型的HPV感染导致不同病变，根据其是否可以引起癌变，HPV亚型可分为高危型和低危型。低危型与性传播疣或尖锐湿疣有关，一般不诱发癌变，常见的低危型为6、11、42、43、44；高危型与子宫颈癌及子宫上皮内瘤变的发生有关，常见的高危型有16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68。研究显示HPV感染存在多样性和地区差异性，各国各地区型别不同，但在全世界范围内最常见的高危型亚型为HPV16，其次往往是HPV18。除了这两个基因型外，其他HPV基因型的分布存在明显的地域差异，非洲较为流行的是HPV45和HPV33，欧洲较为流行的是HPV45，南、北美洲是HPV31、33和45。在亚洲相对较为流行的是HPV58和52。中国是人乳头状瘤病毒(HPV)感染大国，调查显示，中国汉族妇女对于15种常见高危型HPV(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82型)的感染率为15％左右，维吾尔族妇女的感染率约为7.2％。此外，与发达国家只有20-24岁这一个HPV感染高峰不同，中国妇女HPV感染率的年龄组分布曲线呈现出两个高峰(20-24岁和40-44岁)，HPV的感染正日益普遍的影响着中国妇女的生活质量和身心健康。

高危型HPV的持续性感染是宫颈癌发生的必要条件，HPV感染使得宫颈癌的相对危险性增加250倍，而从高危型HPV的持续感染到一般的宫颈癌前病变最终发展为宫颈癌大约需要5-10年。事实上，约99.7％的宫颈癌都是由高危型HPV造成，尤其是HPV 16、18以及HPV31、33、35的反复或持续感染所致。因此，高危HPV病毒是目前最为明确的致癌病毒，有针对性地对高危型HPV进行全面检测，对宫颈癌的早期诊断和治疗具有重要的意义。