[发明专利]一种交通性脑积水的基因检测方法

摘要

本发明公开了一种交通性脑积水的基因检测方法，本发明直接用待测病人的静脉血标本为分析样本,包含以下方法步骤:（1）提取RNA，（2）荧光PCR扩增，（3）荧光扩增，（4）结果分析，本发明的检测方法取样方便，灵敏度高，特异性强，可早期诊断，对于交通性脑积水患者提前预警及采取有效的治疗手段意义重大。

主权项

一种交通性脑积水的基因检测方法，以TGF‑β1的特异性核酸定量标准品为对照，即TGF‑β1的部分序列: 5'‑gagcagcggaccgaggaccagacgcggatctccgtagaacaggaggaaatggagtacttcgccaaggtgccgcacaagttcaacatgagtataaacagtacagcaatcatggggaacaaaaatgtcgcagttcccttcaacatatctgagatacgacaaagtgtcgggaaataccaccagctaaccagcgcagagttgcggattcacatcaagaaacctatgatactcgaagaccaacgggtggaactctactacggtctggacccctcagctcgatacctcactactcgcttaatcaataacaagatgaaagacaaatggatttcctttgatgtgacagaacctctacggaaatggctt‑3',直接用待测病人的静脉血为样本,其特征在于,包含以下方法步骤:（1）提取RNA采取待测病人一定量的标本经前处理,按照常规方法提取RNA,气干后加入10ulDEPC 水溶液溶解RNA；（2）荧光PCR扩增取定量荧光扩增试剂，加入适量DNA聚合酶与防污的尿嘧啶糖基酶，逆转录酶于薄壁试管中，混匀，3000rpm离心数秒，取上述混合液于薄壁管中，同时至少预备两份装有上述混合液的管，一份加入步骤一制备的RNA溶液，另一份加入已经标定的标准品作为对照，立即进行聚合酶链式扩增反应；（3）荧光扩增 样品反应管及对照标准品反应管置于定量荧光PCR仪检测，设置循环条件，进行荧光检测；（4）结果分析 选择荧光检测模式FAM荧光，基线调整6‑16个循环的荧光信号；阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照品的最高点；荧光增长曲线超过阈值线，并呈良好的对数增长，判断为阳性；   所述的步骤（2）荧光PCR扩增中，荧光扩增检测试剂包括一步法RT‑PCR缓冲液、脱氧三磷酸核苷混合物、特异扩增引物及特异性探针；所述的特异扩增引物是：特异性扩增引物引物S1：引物序列为5’‑atgaggctgactctcttgac‑ 3’特异性扩增引物引物S2:引物序列为5’ ‑agctacacttgcaatacttc‑3’所述的特异性探针是探针S3：探针序列为5’‑R‑agtcagatcctcagcaagct‑Q‑3’其中R为报告基因，Q为 淬灭荧光基因。