[发明专利]一种利用TALEN系统定点突变RNase ZS1培育水稻温敏不育系的方法

摘要

本发明公开了一种利用TALEN系统定点突变RNase ZS1培育水稻温敏不育系的方法，其包括靶标序列设计；将左、右侧TALE识别序列转化成识别模块；构建含识别模块的TALEN载体；合成含TALEN‑L和TALEN‑R的双元载体；遗传转化获得阳性转基因植株；选择阳性转基因植株中获得突变的植株；将突变的植株传代种植和分离，获得不带转基因成分但低温下育性恢复可育的植株作为温敏不育株等步骤。通过TALEN系统定点突变失活RNase ZS1蛋白的活性，实现人工培育可以获得不带转基因成分的温敏不育系，具有目的性强，基因组损伤小，规避了转基因带来的可能风险。

主权项

1. 一种利用TALEN系统定点突变RNase ZS1培育水稻温敏不育系的方法，其包括以下步骤：1）靶标序列设计：根据RNase ZS1在水稻的Os02g0214300编码区分别设计左侧TALE识别序列、右侧TALE识别序列；左侧TALE识别序列、右侧TALE识别序列间隔13‑22碱基；识别序列长度为16‑20个碱基；左侧TALE识别序列Target‑TMS5‑1L，序列为SEQ ID NO.1：CGGCCGAAGGCGAAGGC，位于Os02g0214300编码区的61‑77；右侧TALE识别序列Target‑TMS5‑1R，序列为SEQ ID NO.2：CCACGGGGTAGCCCTC，位于Os02g0214300编码区的94‑109；或，左侧TALE识别序列Target‑TMS5‑2L，序列为SEQ ID NO.10：CACCGTCGAGGGCTAC，位于Os02g0214300编码区的87‑102；右侧TALE识别序列Target‑TMS5‑2R，序列为SEQ ID NO.11：CTCCTGCCCGCCGAT，位于Os02g0214300编码区的121‑135；2）将左、右侧TALE识别序列转化成识别模块：根据TALE蛋白RVD区的碱基识别原则，将左、右两侧TALE识别序列转化成识别模块；3）构建含上述步骤2）识别模块的TALEN‑L和TALEN‑R载体；4）合成含TALEN‑L和TALEN‑R的双元载体；5）遗传转化获得阳性转基因植株；6）筛选阳性转基因植株中获得突变的植株；7）上述突变的植株传代种植，获得不带转基因成分且育性恢复可育的植株作为温敏不育株。