[发明专利]应用寡聚体dT分子来避免生成由多聚A载运体诱导的高分子量PCR产物有效
| 申请号： | 201480050339.0 | 申请日： | 2014-09-10 |
| 公开（公告）号： | CN105531381B | 公开（公告）日： | 2019-08-09 |
| 发明（设计）人： | F.伯格曼;S.弗勒纳 | 申请（专利权）人： | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/6848;C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京坤瑞律师事务所 11494 | 代理人： | 封新琴 |
| 地址： | 瑞士*** | 国省代码： | 瑞士;CH |
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| 摘要： | 在RNA分离期间，使用载运体核酸如多聚A‑RNA以增加分离的RNA的收率。所述载运体核酸可能产生高分子量产物，其可能干扰后续步骤如逆转录、PCR和凝胶电泳。本发明因此涉及用于逆转录的方法和试剂盒以及封闭性核酸分子用来封闭载运体多聚A‑RNA的用途。 | ||
| 搜索关键词： | 应用 寡聚体 dt 分子 避免 生成 载运 诱导 分子量 pcr 产物 | ||
【主权项】：
1.一种逆转录方法，其中该方法包括以下步骤：a)提供包含RNA的样品，b)使所述样品与载运体核酸接触，由此生成混合物，其中所述载运体核酸是多聚A‑RNA，c)在如下条件下将该混合物施加到基质，该条件使得发生所述RNA和所述载运体核酸对所述基质的结合，d)将所述基质与所述混合物分离，所述基质具有结合于该基质的所述RNA和所述载运体核酸，e)从所述基质洗脱所述RNA和所述载运体核酸，由此产生洗脱物，f)在如下条件下向所述洗脱物添加封闭性核酸，该条件使得发生所述封闭性核酸对所述载运体核酸的杂交，其中所述封闭性核酸是寡聚体dT分子，它在3’端修饰以阻止通过聚合酶反应对寡聚体dT分子的延伸，g)在如下条件下向来自步骤f)的洗脱物添加引物，该条件使得发生所述引物对所述RNA的杂交，和h)将所述RNA逆转录成cDNA。
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