[发明专利]应用寡聚体dT分子来避免生成由多聚A载运体诱导的高分子量PCR产物

权利要求书

1.一种逆转录方法，其中该方法包括以下步骤：

a)提供包含RNA的样品，

b)使所述样品与载运体核酸接触，由此生成混合物，其中所述载运体核酸是多聚A-RNA，

c)在如下条件下将该混合物施加到基质，该条件使得发生所述RNA和所述载运体核酸对所述基质的结合，

d)将所述基质与所述混合物分离，所述基质具有结合于该基质的所述RNA和所述载运体核酸，

e)从所述基质洗脱所述RNA和所述载运体核酸，由此产生洗脱物，

f)在如下条件下向所述洗脱物添加封闭性核酸，该条件使得发生所述封闭性核酸对所述载运体核酸的杂交，其中所述封闭性核酸是寡聚体dT分子，它在3’端修饰以阻止通过聚合酶反应对寡聚体dT分子的延伸，

g)在如下条件下向来自步骤f)的洗脱物添加引物，该条件使得发生所述引物对所述RNA的杂交，和

h)将所述RNA逆转录成cDNA。

2.权利要求1的方法，其中所述寡聚体dT分子是5’-(dT)n-X-3’，其中所述(dT)n是n聚体同型2’-脱氧胸苷寡核苷酸，其中所述n是18、19、20、21或22，其中所述X选自下组：p、pC3、pC3p、pC3pC3和pC3pC3p，且其中X结合于(dT)n的3’末端羟基基团且其中p是磷酸根和C3是1,3-丙二醇间隔物。

3.权利要求2的方法，其中所述n是20且X是pC3pC3p。

4.权利要求1-3的方法，其中所述引物是随机引物。

5.权利要求4的方法，其中所述随机引物是随机六聚体引物。

6.权利要求1-5的方法，其中所述基质包含玻璃纤维绒。

7.权利要求1-6的方法，其中所述样品选自下组：血清、血液、血浆、泪、细胞培养上清、尿和母乳、唾液、脑脊髓液和精液。

8.封闭性核酸分子用于在逆转录期间封闭载运体多聚A-RNA的用途，其中所述封闭性核酸分子是5’-(dT)n-X-3’，其中所述(dT)n是n聚体同型2’-脱氧-胸苷寡核苷酸，其中所述n是18、19、20、21或22，其中所述X选自下组：p、pC3，pC3p、pC3pC3和pC3pC3p，且其中X结合于(dT)n的3’末端羟基基团和其中p是磷酸根和C3是1,3-丙二醇间隔物。

9.权利要求8的用途，其中所述n是20和X是pC3pC3p。

10.用于实施逆转录的试剂盒，所述试剂盒包含：

a)作为载运体的多聚A-RNA，和

b)根据权利要求8和9的封闭性核酸。