[发明专利]一种基于活性筛选的牡丹皮药材及制剂检测方法

摘要

本发明提供了一种用于牡丹皮药材、中间体和制剂产品多成分质量控制方法。该方法在细胞膜固相色谱技术和糖基化孵育体系筛选出供选择成分群；结合聚类分析和主成分分析确定氧化芍药苷、芍药苷、三没食子酰葡萄糖、五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷和丹皮酚6个主成分基础上，采用同一液相色谱条件建立牡丹皮药材、丹皮提取物中间体、牡丹皮制剂产品中氧化芍药苷、芍药苷、三没食子酰葡萄糖、五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷和丹皮酚的含量同步测定方法；能准确测定这6个成分含量，并确定成分组成结构比范围为：(1.3~1.5): (10.4~13.9): 0.5:(2.7~3.5): (1.0~1.2): (14.9~ 16.1)。

主权项

一种基于活性筛选的牡丹皮药材及制剂检测方法，其特征在于检测指标成分是通过肾系膜细胞、血小板细胞膜固相色谱技术和糖基化产物反应体系筛选，结合聚类分析和主成分分析确定的，采用HPLC法，确定氧化芍药苷、芍药苷、三没食子酰葡萄糖、五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷和丹皮酚为检测指标，所述6个检测指标的含量HPLC法同步测定方法如下：①液相色谱条件：色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈(A)‑0.1％甲酸水溶液(B)，梯度洗脱条件：0‑20min，5％‑10％A；20‑30min，10％‑10％A；30‑80min，10％‑18％A；80‑120min，18％‑50％A；检测波长254nm，流速0.8mL/min，柱温25℃；②对照品溶液的制备：分别精密称取恒重的对照品氧化芍药苷、芍药苷、三没食子酰葡萄糖、五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷和丹皮酚适量，加60％甲醇溶液分别制成每1mL含芍药苷72.15μg、氧化芍药苷59.56μg、三没食子酰葡萄糖89.35μg、五没食子酰葡萄糖109.76μg、苯甲酰芍药苷137.67μg和丹皮酚86.23μg，用甲醇定容至刻度，摇匀；另各取1mL配成混合对照品溶液；③供试品溶液的制备牡丹皮药材供试品溶液的制备：精密称定牡丹皮药材粉末约0.5g，置50mL容量瓶中，加75％乙醇(v/v)20mL，超声或回流处理30min两次，取出，放冷，合并滤液，加75％乙醇定容至50mL刻度，摇匀，经0.45um的微孔滤膜滤过，即得；牡丹皮提取物供试品溶液的制备：精密称定牡丹皮提取物0.1g，置50mL容量瓶中，加75％乙醇(v/v)20mL，超声或回流处理30min两次，取出，放冷，合并滤液，加75％乙醇定容至50mL刻度，摇匀，经0.45um的微孔滤膜滤过，即得；牡丹皮制剂供试品溶液的制备：精密称定牡丹皮制剂粉末约0.25g，置50mL容量瓶中，加75％乙醇(v/v)20mL，超声或回流处理30min两次，取出，放冷，合并滤液，加75％乙醇定容至50mL刻度，摇匀，经0.45um的微孔滤膜滤过，即得；④测定法：高效液相色谱仪分析对照品和供试品溶液，进样体积10μl。