[发明专利]一种基于活性筛选的牡丹皮药材及制剂检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于活性筛选的牡丹皮药材及制剂检测方法，属于中医药研究方法学领域。

背景技术

目前国内外中药药材、中间体、制剂质量控制的方法是在化学成分研究的基础上,建立中药中的某一或两个有效成分(主成分)的定性、定量分析方法，进而控制中药的质量。但这种质量控制方法未能体现中药整体特点，也未能给出这些质控指标与药效相关的证据，更值得关注的是这些成分的质量控制不是越高越好，而是不同的成分应该控制在一定范围比例内，即“组分结构”。很多研究案例结果显示中药(复方)的最佳药效是多种药材或组分之间组成结构的生物学反映。

牡丹皮为双子叶植物，是毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosaAndr.的干燥的根皮。产于安徽、四川、河南、山东等地。牡丹皮始载于《神农本草经》，列为中品，具有清热凉血、活血化淤、退虚热等功效。现代学者对牡丹皮的化学成分进行了许多药理效应研究，认为其具有心血管系统作用、保肝、降血糖、降血脂、降血压等作用，还具有中枢神经系统作用。对牡丹皮及其产品的质量控制，2010年《中国药典》质量控制标准规定药材含丹皮酚不得少于1.2％，该质控标准不能客观准确反应牡丹皮的药材质量。在《中国药典》中收录的近40种成方制剂，对于牡丹皮药材来说，质控指标仅一个或不涉及。

本技术基于活性成分的筛选，结合主成分分析、聚类分析等手段，揭示了牡丹皮药材、中间体、制剂的组成结构特征，确定多成分指标的质控范围，为牡丹皮药材及制剂提供一种多组分质量控制方法。

附图说明

图1肾系膜细胞固相化牡丹皮提取物产物色谱图(A)及化学结构图(B)，其中(a)牡丹皮孵育液；(b)最后一次PBS洗涤液；(c)空白解离液；(d)固相化产物解离液

图2牡丹皮提取物抑制AGEs生成色谱图(A)及化学结构图(B)，其中(a)牡丹皮孵育液；(b)丙酮醛孵育液；(c)牡丹皮与丙酮醛孵育液

图3牡丹皮提取物抑制血小板聚集生成色谱图(A)及化学结构图(B)，其中(a)牡丹皮孵育液；(b)最后一次PBS洗涤液；(c)空白解离液；(d)固相化产物解离液

图4HPLC法测定的不同产地牡丹皮(A)及成分聚类分析结果(B)，注：从前向后依次为湖南、安徽、甘肃、重庆、四川、贵州、河南、河北、浙江、山东产地的牡丹皮吸收峰。

图5效应物质对AGEs诱导的SOD活性(A)及MDA含量(B)的影响

图6效应物质系膜细胞FN蛋白表达的影响

图7效应物质血管内皮细胞凋亡的影响，其中：a,200μg/mL牛血清白蛋白；b,200μg/mL AGEs；c,氨基胍(10μM)+200μg/mL AGEs；d,丹皮酚pae(10-4M)+200μg/mL AGEs；e,三没食子酰葡萄糖(10-4M)+200μg/mL AGEs；f,五没食子酰葡萄糖(10-4M)+200μg/mL AGEs；g,芍药苷(10-4M)+200μg/mL AGEs；h,氧化芍药苷(10-4M)+200μg/mL AGEs；i,苯甲酰芍药苷(10-4M)+200μg/mL AGEs.AGEs组和BSA组相比,###P<0.001；样品组与AGEs组相比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。

图8牡丹皮药材、中间体、配方颗粒6个有效成分HPLC色谱图

图9不同产地牡丹皮对肾系膜细胞ICAM-1、TGF-β1和FN表达的影响及药效聚类分析

发明内容

解决的技术问题：

本发明针对牡丹皮药材、中间体及制剂产品的质量检测现状，提供一种基于高效液相色谱法的牡丹皮药材、中间体及制剂产品质量检测方法，通过主成分分析和聚类分析统计方法，获得主要的质控指标，并经药理活性评估证明其有效，确定指标成分的控制范围，为一种基于活性筛选的牡丹皮药材及制剂检测方法。

技术方案：

基于中医药整体性特点，采用现代活性成分筛选技术筛选牡丹皮药材中多个活性成分，结合数理统计聚类分析和主成分分析，确定与药效相关的6个主要成分，经抗AGEs诱导的肾系膜细胞和血管内皮细胞的活性评估，并确定这些成分的组成结构特征及检测范围，对其药材、中间体、制剂产品进行质量检测。

本发明提供的一种基于活性筛选的牡丹皮药材及制剂检测方法，其主要包括以下步骤: