[发明专利]一种快速检验杂交西瓜种子荃抗绿霸纯度的方法

摘要

本发明公开了一种快速检验杂交西瓜种子荃抗绿霸纯度的方法，特别是一种利用SSR分子标记快速检验杂交西瓜种子荃抗绿霸纯度的方法。其利用SSR引物QYXG3或QYXG7对西瓜杂交品种荃抗绿霸及其父母本的基因组DNA进行扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，找出杂交一代与父母本差异的特征谱带，通过受检种子纯度计算，对荃抗绿霸样品进行检验，其检验的纯度经与田间种植鉴定的纯度对照比较，二者的结果高度一致。本发明的检测方法在5 h之内即可完成种子纯度鉴定工作，具有简单易行、准确快速、费用低、便于推广等特点。适用于对荃抗绿霸西瓜杂交种及其亲本真实性和品种纯度的检验。

主权项

一种快速检验杂交西瓜种子荃抗绿霸纯度的方法，其特征在于，包括如下步骤：1）提取西瓜杂交品种荃抗绿霸样品基因组DNA；2）以西瓜杂交品种荃抗绿霸样品基因组的DNA为模板，选用SSR引物对进行PCR扩增；所述的SSR引物序列为：QYXG3F ：5’‑CCCTATTGCCCATTTTTCTCA‑3’，QYXG3R ：5’‑AAATTTGTGCTCTCCGTGGG‑3’；QYXG7F ：5’‑CATTGCCGTTTCCATTTTCTTCAC‑3’，QYXG7R：5’‑GTAACATCCAGCAGTTCGCCAT‑3’；3）将步骤2）的扩增产物经8%的双垂直板非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，220 V稳压电泳直至溴酚蓝指示剂迁移至可以使扩增DNA片段能够被清楚识别的距离时，停止电泳；银染法染色，拍照记录待测西瓜杂交品种荃抗绿霸样品DNA的特征谱带；4) 提取西瓜杂交品种荃抗绿霸父母本样品的基因组DNA，然后重复上述步骤 2）‑3）的方法，获得父母本样品DNA的特征谱带；5）以父母本样品DNA的特征谱带作为对照，只有同时具有亲本特征谱带的单株才为真正的“荃抗绿霸”杂交种，缺少亲本任意一个特征谱带均被视为非杂交种；再采用下式计算受检样品的种子纯度：受检样品的种子纯度（%）＝（供检样品株数－非杂交种株数）/供检样品株数×100。