[发明专利]TALEs双识别检测方法及其应用

摘要

TALEs双识别检测方法，步骤如下：步骤一：TALEs原核蛋白表达质粒的构建；步骤二：原核表达TALEs蛋白；步骤三：TALEs蛋白包被在微孔板上步骤，加入DNA样品，DNA被包被在微孔板上的TALEs蛋白包捕获；步骤四：用标记有碱性磷酸酶的TALEs蛋白识别被捕获的DNA，加入碱性磷酸酶的底物，产生化学发光信号，并判读信号。本发明利用TALEs蛋白特异性识别DNA序列的特性，然后通过化学发光放大信号，灵敏度比较高，可以用于快速诊断。本发明与传统检测手段有很大的不同，没有中间的PCR扩展步骤，检测灵敏度比较高，假阳性率比较低。该方法不仅可以用于科研的基因突变检测等，也可以用做临床诊断。

主权项

TALEs双识别检测方法，其特征在于，步骤如下：步骤一：TALEs原核蛋白表达质粒的构建：用NdeI和BamHI切pET‑16b载体，然后把TALEs序列克隆到pET‑16b载体的NdeI和BamH位点，得pET‑16b‑TALEs原核表达载体；步骤二：原核表达TALEs蛋白：将步骤一制备的pET‑16b‑TALEs原核表达载体转化到大肠杆菌BL21中，IPTG诱导，收集细菌并裂解细胞，离心取上清液，进行Ni柱亲和层析，待目的蛋白与Ni柱结合之后，用漂洗液洗涤，后用洗脱缓冲液冲洗，将洗脱组分中的高盐缓冲液置换成PBS溶液，最后进行SDS‑PAGE的检测，所得即为纯化的TALEs蛋白；步骤三：将TALEs蛋白定向包被在微孔板上，加入DNA样品，DNA被包被在微孔板上的TALEs蛋白包捕获；步骤四：用标记有碱性磷酸酶的TALEs蛋白识别被捕获的DNA，加入碱性磷酸酶的底物，产生化学发光信号，并判读信号。