[发明专利]TALEs双识别检测方法及其应用有效
| 申请号： | 201410726245.2 | 申请日： | 2014-12-04 |
| 公开（公告）号： | CN104498594A | 公开（公告）日： | 2015-04-08 |
| 发明（设计）人： | 李云英 | 申请（专利权）人： | 李云英 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/42 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 510000 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | tales 识别 检测 方法 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.TALEs双识别检测方法，其特征在于，步骤如下：
步骤一：TALEs原核蛋白表达质粒的构建：用NdeI和BamHI切pET-16b载体，然后把TALEs序列克隆到pET-16b载体的NdeI和BamH位点，得pET-16b-TALEs原核表达载体；
步骤二：原核表达TALEs蛋白：将步骤一制备的pET-16b-TALEs原核表达载体转化到大肠杆菌BL21中，IPTG诱导，收集细菌并裂解细胞，离心取上清液，进行Ni柱亲和层析，待目的蛋白与Ni柱结合之后，用漂洗液洗涤，后用洗脱缓冲液冲洗，将洗脱组分中的高盐缓冲液置换成PBS溶液，最后进行SDS-PAGE的检测，所得即为纯化的TALEs蛋白；
步骤三：将TALEs蛋白定向包被在微孔板上，加入DNA样品，DNA被包被在微孔板上的TALEs蛋白包捕获；
步骤四：用标记有碱性磷酸酶的TALEs蛋白识别被捕获的DNA，加入碱性磷酸酶的底物，产生化学发光信号，并判读信号。
2.权利要求1所述的TALEs双识别检测方法在基因诊断中的应用。
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