[发明专利]一种用MALDI-TOT-TOF质谱对蛋白质N端序列进行从头测序的方法和试剂盒

摘要

本发明提供了一种用MALDI-TOT-TOF(基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间)质谱对蛋白质N端序列进行从头测序的方法和试剂盒。该方法涉及蛋白质的分离、还原烷基化、蛋白质的化学修饰、酶切肽段的质谱分析、蛋白质N端肽段的质谱识别与从头测序。该方法对胶内蛋白质的赖氨酸进行胍基化，选择性地将TMPP-Ac修饰在蛋白质N端氨基上；并通过加入终止试剂和洗涤。该方法所得的蛋白质N端氨基修饰物不受过量的试剂和相应的副产物的影响，与质谱技术相容。该方法可对蛋白质的N端肽进行富集，结合反相液相色谱和生物质谱技术，既容易确定蛋白质的N端肽段，又可以很方便地进行从头测序。

主权项

一种用MALDI‑TOT‑TOF质谱对蛋白质N端序列进行从头测序的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)用一维凝胶电泳分离蛋白质或将蛋白质凝结在胶上；(2)在胶内用还原剂打开蛋白质分子中的二硫键，破坏其高级结构；用烷基化试剂封闭巯基，防止其重新形成二硫键；(3)在胶内对蛋白质的赖氨酸进行胍基化；(4)在胶内对蛋白质N端氨基进行酰基化修饰，然后进行终止和洗涤，去除过量的修饰试剂和相应的副产物；(5)用化学消化或酶消化法对蛋白质进行消化，产生适于质谱分析的肽段；(6)用质谱分析技术分析蛋白质N端肽段，使其裂解产生碎片离子的质谱图；(7)用反相液相色谱技术分离富集蛋白质N端肽段，用质谱分析技术高通量地测定蛋白质N端肽段。