[发明专利]一种用MALDI-TOT-TOF质谱对蛋白质N端序列进行从头测序的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种用MALDI-TOT-TOF质谱对蛋白质N端序列进行从头测序的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)用一维凝胶电泳分离蛋白质或将蛋白质凝结在胶上；

(2)在胶内用还原剂打开蛋白质分子中的二硫键，破坏其高级结构；用烷基化试剂封闭巯基，防止其重新形成二硫键；

(3)在胶内对蛋白质的赖氨酸进行胍基化；

(4)在胶内对蛋白质N端氨基进行酰基化修饰，然后进行终止和洗涤，去除过量的修饰试剂和相应的副产物；

(5)用化学消化或酶消化法对蛋白质进行消化，产生适于质谱分析的肽段；

(6)用质谱分析技术分析蛋白质N端肽段，使其裂解产生碎片离子的质谱图；

(7)用反相液相色谱技术分离富集蛋白质N端肽段，用质谱分析技术高通量地测定蛋白质N端肽段。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述胍基化为用O-甲基异脲或S-甲基异脲进行胍基化修饰。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，酰基化修饰试剂为三(2,4,6-三甲氧苯基)膦基乙酰基衍生物，其使蛋白质N端氨基带上TMPP-Ac基团。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述三(2,4,6-三甲氧苯基)膦基乙酰基衍生物为(N-琥珀酰亚胺基氧代羰基甲基)三(2,4,6-三甲氧苯基)溴化膦。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中进行终止的化学试剂为羟胺、赖氨酸或甘氨酸；进行洗涤的化学试剂为去离子水和乙腈。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述质谱分析技术为LC-MALDI-TOF-TOF或MALDI-TOF-TOF。

7.一种用MALDI-TOT-TOF质谱对蛋白质N端序列进行从头测序的试剂盒，其特征在于，此试剂盒含有：

(a)一种化学试剂，对蛋白质的赖氨酸进行胍基化修饰；

(b)一种化学试剂，对蛋白质的N端氨基进行修饰，使其带上TMPP-Ac基团；

(c)两种或多种化学试剂，对蛋白质的修饰反应进行终止；

(d)两种或多种化学试剂，去除过量的反应试剂和相应的副产物。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，(a)中所述化学试剂为O-甲基异脲或S-甲基异脲。

9.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，(b)中所述化学试剂为三(2,4,6-三甲氧苯基)膦基的乙酰化试剂。

10.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，(c)中所述化学试剂为三氟乙酸水溶液、羟胺或赖氨酸或甘氨酸；(d)中所述化学试剂为乙腈和去离子水。