[发明专利]高纯度重组人干扰素α2b的制备方法

摘要

本发明公开了一种高纯度重组人干扰素α2b的制备方法，其包括以下步骤a)将重组人干扰素α2b菌体裂解、复性，得复性产物；b)将复性产物依次通过阳离子柱、疏水柱和阴离子柱层析纯化，即得产品。本发明采用阳离子柱、疏水柱和阴离子柱的组合依次层析的方式极为有效的捕获重组人干扰素α2b，以及去除其中的杂蛋白和相关蛋白，经检测，采用本发明公开的制备方法得到的重组人干扰素α2b的RP‑HPLC检测纯度大于95％，且重组人干扰素α2b的N端测序不含Met，如此可以有效避免在患者体内产生免疫反应及副作用，进而保证重组人干扰素α2b的临床疗效和使用安全。

主权项

一种高纯度重组人干扰素α2b的制备方法，其包括以下步骤：a)将重组人干扰素α2b菌体裂解、复性，得复性产物；b)将复性产物依次通过阳离子柱、疏水柱和阴离子柱层析纯化，即得产品；所述的阳离子柱层析方法为：采用缓冲液A预平衡阳离子交换介质后上样，用缓冲液B进行第一次洗脱，待基线归零后，用缓冲液C进行第二次洗脱，收集第二个蛋白洗脱峰的洗脱液；所述的疏水柱层析方法为：向阳离子柱层析收集的洗脱液中加入硫酸铵溶液至洗脱液中硫酸铵浓度为0.8‑1.5M，采用缓冲液D预平衡疏水层析介质后上样，用缓冲液E进行第一次洗脱，待基线归零后，用缓冲液F进行第二次洗脱，收集第一个蛋白洗脱峰的洗脱液；所述的阴离子柱层析方法为：将疏水柱层析收集的洗脱液稀释5‑10，采用缓冲液G预平衡阴离子交换介质后上样，先用缓冲液H洗涤10‑20个柱体积，然后再用缓冲液I洗脱，收集第一个洗脱峰；所述的缓冲液G为磷酸氢二钠‑磷酸二氢钠、硼酸‑硼酸钠、Tris‑盐酸或甘氨酸‑氢氧化钠，缓冲液G的pH为7.4‑9.0、浓度5‑50mM；缓冲液H为磷酸氢二钠‑磷酸二氢钠、Bis‑Tris‑盐酸或乙酸‑乙酸钠，缓冲液H的pH为4.5‑7.0、浓度10‑50mM，且缓冲液H中含有0‑20mM氯化钠；缓冲液I为磷酸氢二钠‑磷酸二氢钠、Bis‑Tris‑盐酸或乙酸‑乙酸钠，缓冲液I的pH为4.5‑7.0、浓度20‑50mM，且缓冲液I中含有50‑80mM氯化钠；所述的阴离子交换介质为Q‑Sepharose FF、DEAE‑Sepharose FF或Q‑Sepharose XL。