[发明专利]高纯度重组人干扰素α2b的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种高纯度重组人干扰素α2b的制备方法。

背景技术

干扰素(IFN)是一类具有广谱抗病毒活性的蛋白质，根据干扰素氨基酸结构、抗原性和细胞来源，可将其分为三类：α干扰素、β干扰素以及γ干扰素，其中α干扰素是应用较为广泛的一类干扰素，临床上主要用于治疗乙型肝炎、丙型肝炎等病毒性疾病，也用作一些肿瘤化疗药物的联合用药。但是，重组蛋白药物在生产或储存时，其中的氨基酸易被修饰而产生各种变异体，这些变异体被称作相关蛋白(Related proteins)，具体的，这些相关蛋白的产生主要来自以下两个方面：一是原核系统在表达异源蛋白质时，因其N末端氨基酸的不完全加工导致的产品N末端含有多种结构形式，如N末端甲硫胺酰化、乙酰化、甲酰化以及氨基酸残基缺失等；二是干扰素本身化学降解会生成相关蛋白，如脱酰胺、氧化、水解等。相关蛋白的存在会带来一些不良后果，尤其是结构上的变异可能会在患者体内产生免疫反应及副作用，进而影响重组蛋白药物的临床疗效，因此，相关蛋白的分析及控制对于重组蛋白药物的安全、有效使用来说尤为重要。

目前，欧洲药典是采用RP-HPLC法(即反相高效液相色谱法)分离检测干扰素α2b中的大部分相关蛋白，而我国药典目前还没有采用上述方法检测相关蛋白，同时，中国和欧洲药典对干扰素α2b的N段序列的标准也有差异，具体如下表1所示：

干扰素α2b的质量标准

项目中国药典2010欧洲药典8.0电泳纯度≥95％≥99％

SE-HPLC纯度≥95％无RP-HPLC纯度无≥95％比活性≥1×10⁸IU/mg≥1.4×10⁸IU/mg等电点4.0-6.75.8-6.3N段序列(M)CDLPQTHSLGSRRTLCDLPQTHSLGSRRTL