[发明专利]高纯度重组人干扰素α2b的制备方法

权利要求书

1.一种高纯度重组人干扰素α2b的制备方法，其包括以下步骤：

a)将重组人干扰素α2b菌体裂解、复性，得复性产物；

b)将复性产物依次通过阳离子柱、疏水柱和阴离子柱层析纯化，即得产品；

所述的阳离子柱层析方法为：采用缓冲液A预平衡阳离子交换介质后上样，用缓冲液B进行第一次洗脱，待基线归零后，用缓冲液C进行第二次洗脱，收集第二个蛋白洗脱峰的洗脱液；

所述的疏水柱层析方法为：向阳离子柱层析收集的洗脱液中加入硫酸铵溶液至洗脱液中硫酸铵浓度为0.8-1.5M，采用缓冲液D预平衡疏水层析介质后上样，用缓冲液E进行第一次洗脱，待基线归零后，用缓冲液F进行第二次洗脱，收集第一个蛋白洗脱峰的洗脱液；

所述的阴离子柱层析方法为：将疏水柱层析收集的洗脱液稀释5-10，采用缓冲液G预平衡阴离子交换介质后上样，先用缓冲液H洗涤10-20个柱体积，然后再用缓冲液I洗脱，收集第一个洗脱峰；

所述的缓冲液G为磷酸氢二钠-磷酸二氢钠、硼酸-硼酸钠、Tris-盐酸或甘氨酸-氢氧化钠，缓冲液G的pH为7.4-9.0、浓度5-50mM；缓冲液H为磷酸氢二钠-磷酸二氢钠、Bis-Tris-盐酸或乙酸-乙酸钠，缓冲液H的pH为4.5-7.0、浓度10-50mM，且缓冲液H中含有0-20mM氯化钠；缓冲液I为磷酸氢二钠-磷酸二氢钠、Bis-Tris-盐酸或乙酸-乙酸钠，缓冲液I的pH为4.5-7.0、浓度20-50mM，且缓冲液I中含有50-80mM氯化钠；

所述的阴离子交换介质为Q-Sepharose FF、DEAE-Sepharose FF或Q-Sepharose XL。

2.根据权利要求1所述的高纯度重组人干扰素α2b的制备方法，其特征在于：所述的缓冲液A是磷酸氢二钠-磷酸二氢钠、柠檬酸-柠檬酸钠、磷酸氢二钠-柠檬酸、乙酸-乙酸钠或Bis-Tris-盐酸，缓冲液A的pH为3.6-6.0、浓度20-50mM；缓冲液B是加有50-100mM 氯化钠溶液的缓冲液A；缓冲液C是加有100-200mM氯化钠溶液的缓冲液A；

所述的阳离子交换介质为CM-Sepharose FF、SP-Sepharose FF、S-Sepharose FF或SP-Sepharose XL。

3.根据权利要求1或2所述的高纯度重组人干扰素α2b的制备方法，其特征在于：所述的缓冲液D是浓度为0.8-1.5M的硫酸铵溶液，缓冲液E是浓度为0.4-0.7M的硫酸铵溶液，缓冲液F是浓度为0.1-0.2M的硫酸铵溶液；

所述的疏水层析交换介质为Butyl Sepharose 4FF、Octyl Sepharose 4FF或Phenyl Sepharose 6FF。

4.根据权利要求1所述的高纯度重组人干扰素α2b的制备方法，其特征在于：所述步骤a的具体操作步骤如下：

1)按照1g:3ml的质量体积比向重组人干扰素α2b菌体中加入6M盐酸胍，在3-5℃条件下搅拌裂解4h，得裂解液；

2)将裂解液装入透析袋中，依次透析pH7.4的PBS两次、pH3.0的20mM醋酸两次以使裂解液复性；

3)将复性的裂解液离心，取上清液过滤，得到的滤液即为复性产物。