[发明专利]人源沉默信息调节因子5的活性荧光检测方法

摘要

本发明公开了一种人源沉默信息调节因子5的活性荧光筛选方法，本发明利用含有荧光基团与荧光淬灭基团、且带有琥珀酰化修饰基团的多肽为底物，将荧光强度与Sirtuin5的酶活性关联起来，FRET效应可以使底物琥珀酰化赖氨酸这一Sirtuin5识别位点位于底物的中部，这样一来，使得底物多肽更接近于Sirtuin5的天然底物，结合更紧密 ；可以给予更多选择的荧光基团，得到更可靠的筛选结果。这样的方法可应用于Sirtuin5调节剂的筛选，或是生物样本中的Sirtuin5活性检测，具有微型化、自动化、快速可靠等特点，适用于高通量的应用。

主权项

一种人源沉默信息调节因子5的活性荧光筛选方法，其特征在于：以含有荧光基团与荧光淬灭基团、且带有琥珀酰化、丙二酰化、戊二酰化或羟甲基戊二酰化修饰基团的多肽为底物， 1）将所述底物与人源沉默信息调节因子5孵育，脱去底物的赖氨酸残基上的琥珀酰化、丙二酰化、戊二酰化或羟甲基戊二酰化修饰，得到无修饰的赖氨酸多肽；2）将所述的无修饰的赖氨酸多肽与蛋白水解酶裂解液孵育，从赖氨酸的C端裂解肽键；使荧光强度与上述的无修饰的赖氨酸多肽关联起来，该检测得到的荧光强度与人源沉默信息调节因子5的酶活性具有相关性。