[发明专利]人源沉默信息调节因子5的活性荧光检测方法

权利要求书

1.一种人源沉默信息调节因子5的活性荧光筛选方法，其特征在于：以含有荧光基团与荧光淬灭基团、且带有琥珀酰化、丙二酰化、戊二酰化或羟甲基戊二酰化修饰基团的多肽为底物， 1）将所述底物与人源沉默信息调节因子5孵育，脱去底物的赖氨酸残基上的琥珀酰化、丙二酰化、戊二酰化或羟甲基戊二酰化修饰，得到无修饰的赖氨酸多肽；2）将所述的无修饰的赖氨酸多肽与蛋白水解酶裂解液孵育，从赖氨酸的C端裂解肽键；使荧光强度与上述的无修饰的赖氨酸多肽关联起来，该检测得到的荧光强度与人源沉默信息调节因子5的酶活性具有相关性。

2.根据权利要求1所述的人源沉默信息调节因子5的活性荧光筛选方法，其特征在于：所述的以含有荧光基团与荧光淬灭基团、且带有琥珀酰化、丙二酰化、戊二酰化或羟甲基戊二酰化修饰基团的多肽为底物具有如下结构式：

式中，R1及R2均表示3个以上氨基酸；所述的多肽为通过肽键相连的3个以上的氨基酸；在该氨基酸序列中没有无修饰的赖氨酸或者精氨酸，且琥珀酰化、丙二酰化、戊二酰化或羟甲基戊二酰化赖氨酸残基不能位于多肽的两端。

3.根据权利要求1所述的人源沉默信息调节因子5的活性荧光筛选方法，其特征在于：所述的配对的荧光基团和荧光淬灭基团包括Edans/Dabcyl、Trp/Dansyl、Trp/DNP、MCA/DNP, Abz/DNP或Abz/Tyr(NO₂)。

4.根据权利要求1所述的人源沉默信息调节因子5的活性荧光筛选方法，其特征在于：所述的蛋白水解酶裂解液为蛋白质裂解液其有效成分为胰蛋白酶、羧肽酶或gluc-C。

5.根据权利要求1所述的人源沉默信息调节因子5的活性荧光筛选方法，其特征在于：所述底物与人源沉默信息调节因子5的体积比为10:1，孵育时间为30分钟；所得的无修饰的赖氨酸多肽与蛋白水解酶裂解液的体积比为10：1，孵育时间为1小时；上述的孵育温度为25-37℃。