[发明专利]人源沉默信息调节因子5的活性荧光检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及药学领域，尤其是一种人源沉默信息调节因子5（Sirtuin 5或SIRT5）的活性荧光检测方法。

背景技术

组蛋白去乙酰化酶是一类催化各种底物蛋白赖氨酸残基侧链的乙酰基水解的蛋白酶家族。目前发现的人源的组蛋白去乙酰化酶包括4个亚类共 18个亚种。按催化机理的不同，它们分为经典的I类、II类和IV类以锌为辅酶的组蛋白去乙酰化酶(HDAC，有11种分别是HDAC1到HDAC11)[ A. J. de Ruijter, et al. Biochem. J. 2003, 370, 737]；另外，比较特殊的III类以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）为辅酶的组蛋白去乙酰化酶，也叫做沉默信息调节因子(Sirtuin，有7种分别是SIRT1到SIRT7) 。根据蛋白序列的相似性以及进化分类，所有物种的Sirtuin又被分成四大类：SIRT1, SIRT2, SIRT3属于I类；SIRT4属于II类；SIRT5属于III类；SIRT6和SIRT7属于IV类[A. A. Sauve, et al. Annu. Rev. Biochem. 2006, 75, 435]。

研究表明，HDAC抑制剂可以抑制肿瘤细胞的生长、促进其分化及凋亡，而对正常细胞几乎没影响。因此，它们已成为新一代明星靶向抗癌药物，目前多种HDAC抑制剂正处于临床前期和临床试验中[G.Giannini,et al.Future Med.Chem.2012,4,1439；S.Minucci,et al.Nature Reviews Cancer 2006,6,38]。Vorinostat和FK228已被美国FDA分别于2006年和2009年批准用于治疗难治性的皮肤T细胞淋巴瘤[M.Duvic,et al.Blood 2007,109,31；R.L.Piekarz,et al.J.Clin.Oncol.2009,27,5410]。已上市的这两个药物都是机理型的HADC抑制剂，但它们都 不是选择性地只抑制某一个HDAC。这有可能导致这两个药物在治疗过程中会带来的一些副作用，如疲劳、恶心、腹泻、肺栓塞和血小板减少等，甚至极个别的心脏毒性[G.Giannini,et al.Future Med.Chem.2012,4,1439；S.Minucci,et al.Nature Reviews Cancer 2006,6,38]。

相对于HDAC抑制剂， Sirtuin抑制剂的抗肿瘤研究相对滞后，报道的不多[S. Sanchez-Fidalgo, et al. Curr. Med. Chem. 2012, 19, 2414]。目前只有一个针对Sirtuin的非特异性抑制剂（EX-527）在欧洲进入一期临床研究 [Y. Zhang, et al. Oncogene2009, 28, 445]。

Sirtuin抑制剂开发相对滞后的主要原因在于，在这四大类的Sirtuin当中，仅有I类Sirtuin（即SIRT1,SIRT2和SIRT3）具有显著的去乙酰化酶活；而其他的II、III、IV类Sirtuin（SIRT4、 SIRT5、SIRT6和SIRT7）的去乙酰化酶活则是非常微弱[E. Michishita, et al. Mol. Biol. Cell2005, 16, 4623; G. Liszt, et al. J. Biol. Chem.2005, 280, 21323; M. C. Haigis, et al. Cell2006, 126, 941; A. Schuetz, et al. Structure, 2007, 15, 277; E. Michishita et al. Nature, 2008, 452, 292]。对于这些仅具有微弱去乙酰化活性的Sirtuin来说，我们很难开发出可靠的Sirtuin活性筛选方法去开发它们的调节剂。