[发明专利]一种耐药肝癌HepG2细胞模型的构建方法

摘要

一种耐药肝癌HepG2细胞模型的构建方法，该方法以HepG2细胞重悬于含10％小牛血清的DMEM培养基中并接种培养瓶中，待细胞完全贴壁后用无血清培基洗涤，并更换无血清的DMEM培养液同步化6h，再行更换含5％小牛血清的培养基并加入0.5～1μmol/L胰岛素诱导72h即可。本发明之构建方法具有操作简单，成本低的特点，耐药肝癌HepG2细胞模型稳定性高、自噬活性高，并具有高自噬活性导致的化疗药物耐受性。实验证明，通过本发明建立的耐药肝癌HepG2细胞模型具有稳定72小时以上的胰岛素抵抗性。

主权项

一种耐药肝癌HepG2细胞模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)预处理细胞：将常规培养的肝癌HepG2细胞接种于含10％DMEM培养基中在37℃，5％CO₂培养箱中孵育至少12h，使之完全贴壁后备用；(2)建立细胞模型：先用无血清培基洗涤步骤(1)中备用的肝癌HepG2细胞，接着更换无血清的DMEM培养液同步化6h，然后加入0.5～1μmol/L胰岛素，置于37℃，5％CO₂培养箱中孵育72h，从培养箱中取出弃培养上清液，接着用0.01mol/L磷酸缓冲盐溶液洗涤1～2次，然后再用pH 6.0的酸性DMEM培养液37℃孵育10～15min；再用0.01mol/L磷酸缓冲盐溶液洗涤2～3次，即成。