[发明专利]一种耐药肝癌HepG2细胞模型的构建方法

权利要求书

1.一种耐药肝癌HepG2细胞模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)预处理细胞：将常规培养的肝癌HepG2细胞接种于含10％DMEM培养基中在37℃，5％CO₂培养箱中孵育至少12h，使之完全贴壁后备用；

(2)建立细胞模型：先用无血清培基洗涤步骤(1)中备用的肝癌HepG2细胞，接着更换无血清的DMEM培养液同步化6h，然后加入0.5～1μmol/L胰岛素，置于37℃，5％CO₂培养箱中孵育72h，从培养箱中取出弃培养上清液，接着用0.01mol/L磷酸缓冲盐溶液洗涤1～2次，然后再用pH 6.0的酸性DMEM培养液37℃孵育10～15min；再用0.01mol/L磷酸缓冲盐溶液洗涤2～3次，即成。

2.根据权利要求1所述的耐药肝癌HepG2细胞模型的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，从常规培养的肝癌HepG2细胞中选取生长良好并处于对数生长期肝癌HepG2细胞，接种于含10％DMEM培养基中在37℃，5％CO₂培养箱中孵育至少12h，使之完全贴壁后备用。

3.根据权利要求1或2所述的耐药肝癌HepG2细胞模型的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，先用无血清培基洗涤步骤(1)中备用的肝癌HepG2细胞，接着更换无血清的DMEM培养液同步化6h，然后加入0.5μmol/L胰岛素，置于37℃，5％CO₂培养箱中孵育72h，从培养箱中取出弃培养上清液，接着用0.01mol/L磷酸缓冲盐溶液洗涤2次，然后再用pH 6.0的酸性DMEM培养液37℃孵育15min；再用0.01mol/L磷酸缓冲盐溶液洗涤3次，即成。