[发明专利]新城疫弱毒苗O-2′-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖纳米粒缓释剂的制备方法无效

专利信息
申请号: 201410583419.4 申请日: 2014-10-27
公开(公告)号: CN104324372A 公开(公告)日: 2015-02-04
发明(设计)人: 赵凯;王晓华 申请(专利权)人: 黑龙江大学
主分类号: A61K39/17 分类号: A61K39/17;A61K9/52;A61K47/48;A61P31/14;C08B37/08
代理公司: 哈尔滨市松花江专利商标事务所 23109 代理人: 侯静
地址: 150080 黑龙*** 国省代码: 黑龙江;23
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摘要: 新城疫弱毒苗O-2′-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖纳米粒缓释剂的制备方法,涉及一种新城疫弱毒苗纳米粒缓释剂的制备方法。是要解决现有壳聚糖纳米粒聚合物存在药物包封率低、稳定性差、释药时间短的问题。方法:一、O-2′-HACC的合成:A、N-苯亚甲基壳聚糖的合成;B、O-季铵盐-N-苯亚甲基壳聚糖的合成;C、O-2′-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的合成;D、样品精制;二、NDV/La Sota-O-2′-HACC-NPs的制备。本发明制备的NDV/La Sota-O-2′-HACC-NPs粒径容易控制,平均粒径为303.5nm,平均电位为+46.36mv,包封率可达95.68%。用于生物医药领域。
搜索关键词: 新城 疫弱毒苗 丙基 甲基 氯化铵 聚糖 纳米 粒缓释剂 制备 方法
【主权项】:
新城疫弱毒苗O‑2′‑羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖纳米粒缓释剂的制备方法,其特征在于该方法按以下步骤进行:一、O‑2′‑HACC的合成:A、N‑苯亚甲基壳聚糖的合成将3‑6g壳聚糖粉末溶于100‑200mL体积百分浓度5%~15%的醋酸溶液中,在室温下加入30‑80mL无水乙醇,边滴加边搅拌,然后逐滴加入10‑20g苯甲醛,30min内加完,边滴加边搅拌,得溶液;向溶液中滴加1.0~2.0mol/L NaOH溶液将溶液调至中性,真空抽滤析出沉淀,然后用甲醇多次洗涤沉淀除去未反应的苯甲醛,将沉淀于35~50℃烘箱中放置20h,得纤维状浅黄色固体N‑苯亚甲基壳聚糖;B、O‑季铵盐‑N‑苯亚甲基壳聚糖的合成将30‑80mL异丙醇和6‑18g 2,3‑环氧丙基三甲基氯化铵混合制成ETA的异丙醇溶液,取1.5‑5.6g N‑苯亚甲基壳聚糖置于圆底烧瓶中,然后逐滴加入ETA的异丙醇溶液,在N2保护条件下于60~85℃水浴搅拌反应12~20h,过滤,依次用甲醇和丙酮洗涤沉淀,得乳白色固状物O‑季铵盐‑N‑苯亚甲基壳聚糖;C、O‑2′‑羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的合成向40‑60mL 0.2‑0.5mol/L氯化氢乙醇溶液中加入2‑5g O‑季铵盐‑N‑苯亚甲基壳聚糖,室温搅拌24h后,减压蒸馏20min,得胶状物;然后向胶状物中加入10‑30mL蒸馏水充分溶解,再用丙酮沉淀,过滤,得固体,固体于80℃烘箱中烘干,得浅灰色固状物O‑2′‑HACC;D、样品精制取O‑2′‑HACC溶于去离子水中,用足量的丙酮进行沉淀,3G砂芯漏斗抽滤,所得沉淀溶于蒸馏水中,置于透析袋中透析48h,每隔6h更换一次蒸馏水,待浓缩到2mL时,加入足量的丙酮重新沉淀,抽滤,所得固体真空干燥,得到精制的样品O‑2′‑HACC;二、NDV/La Sota‑O‑2′‑HACC‑NPs的制备:a、取O‑2′‑HACC溶于去离子水中配制成浓度为0.5‑2mg/mL的O‑2′‑HACC溶液,然后取5mL O‑2′‑HACC溶液并滴加1.25‑7.5mL新城疫La Sota株病毒液,磁力搅拌3min,获得溶液A;b、溶液A在室温、无菌条件下以900‑1300r/min磁力搅拌30s,然后滴加3.5mL浓度为0.5‑3mg/mL的三聚磷酸钠,维持在5min内匀速滴完,继续磁力搅拌5‑30min,再滴加1mL的PBS,维持在5min内匀速滴完,继续磁力搅拌5‑30min,然后滴加1mL的司班‑80,维持在5min内匀速滴完,继续磁力搅拌5‑30min,获得溶液B;c、将溶液B于4℃、8000‑13000r/min离心10‑30min,取沉淀并用PBS洗三次,然后加入浓度为0.01mol/L的PBS悬浮,获得NDV/La Sota‑O‑2′‑HACC‑NPs悬液;d、在NDV/La Sota‑O‑2′‑HACC‑NPs悬液中加入质量浓度为5%的蔗糖脱脂奶,真空冷冻干燥24h,获得新城疫弱毒苗O‑2′‑羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖纳米粒缓释剂。
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