[发明专利]新城疫弱毒苗O-2′-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖纳米粒缓释剂的制备方法

摘要

新城疫弱毒苗O-2′-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖纳米粒缓释剂的制备方法，涉及一种新城疫弱毒苗纳米粒缓释剂的制备方法。是要解决现有壳聚糖纳米粒聚合物存在药物包封率低、稳定性差、释药时间短的问题。方法：一、O-2′-HACC的合成：A、N-苯亚甲基壳聚糖的合成；B、O-季铵盐-N-苯亚甲基壳聚糖的合成；C、O-2′-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的合成；D、样品精制；二、NDV/La Sota-O-2′-HACC-NPs的制备。本发明制备的NDV/La Sota-O-2′-HACC-NPs粒径容易控制，平均粒径为303.5nm，平均电位为+46.36mv，包封率可达95.68％。用于生物医药领域。

主权项

新城疫弱毒苗O‑2′‑羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖纳米粒缓释剂的制备方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：一、O‑2′‑HACC的合成：A、N‑苯亚甲基壳聚糖的合成将3‑6g壳聚糖粉末溶于100‑200mL体积百分浓度5％～15％的醋酸溶液中，在室温下加入30‑80mL无水乙醇，边滴加边搅拌，然后逐滴加入10‑20g苯甲醛，30min内加完，边滴加边搅拌，得溶液；向溶液中滴加1.0～2.0mol/L NaOH溶液将溶液调至中性，真空抽滤析出沉淀，然后用甲醇多次洗涤沉淀除去未反应的苯甲醛，将沉淀于35～50℃烘箱中放置20h，得纤维状浅黄色固体N‑苯亚甲基壳聚糖；B、O‑季铵盐‑N‑苯亚甲基壳聚糖的合成将30‑80mL异丙醇和6‑18g 2,3‑环氧丙基三甲基氯化铵混合制成ETA的异丙醇溶液，取1.5‑5.6g N‑苯亚甲基壳聚糖置于圆底烧瓶中，然后逐滴加入ETA的异丙醇溶液，在N₂保护条件下于60～85℃水浴搅拌反应12～20h，过滤，依次用甲醇和丙酮洗涤沉淀，得乳白色固状物O‑季铵盐‑N‑苯亚甲基壳聚糖；C、O‑2′‑羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的合成向40‑60mL 0.2‑0.5mol/L氯化氢乙醇溶液中加入2‑5g O‑季铵盐‑N‑苯亚甲基壳聚糖，室温搅拌24h后，减压蒸馏20min，得胶状物；然后向胶状物中加入10‑30mL蒸馏水充分溶解，再用丙酮沉淀，过滤，得固体，固体于80℃烘箱中烘干，得浅灰色固状物O‑2′‑HACC；D、样品精制取O‑2′‑HACC溶于去离子水中，用足量的丙酮进行沉淀，3G砂芯漏斗抽滤，所得沉淀溶于蒸馏水中，置于透析袋中透析48h，每隔6h更换一次蒸馏水，待浓缩到2mL时，加入足量的丙酮重新沉淀，抽滤，所得固体真空干燥，得到精制的样品O‑2′‑HACC；二、NDV/La Sota‑O‑2′‑HACC‑NPs的制备：a、取O‑2′‑HACC溶于去离子水中配制成浓度为0.5‑2mg/mL的O‑2′‑HACC溶液，然后取5mL O‑2′‑HACC溶液并滴加1.25‑7.5mL新城疫La Sota株病毒液，磁力搅拌3min，获得溶液A；b、溶液A在室温、无菌条件下以900‑1300r/min磁力搅拌30s，然后滴加3.5mL浓度为0.5‑3mg/mL的三聚磷酸钠，维持在5min内匀速滴完，继续磁力搅拌5‑30min，再滴加1mL的PBS，维持在5min内匀速滴完，继续磁力搅拌5‑30min，然后滴加1mL的司班‑80，维持在5min内匀速滴完，继续磁力搅拌5‑30min，获得溶液B；c、将溶液B于4℃、8000‑13000r/min离心10‑30min，取沉淀并用PBS洗三次，然后加入浓度为0.01mol/L的PBS悬浮，获得NDV/La Sota‑O‑2′‑HACC‑NPs悬液；d、在NDV/La Sota‑O‑2′‑HACC‑NPs悬液中加入质量浓度为5％的蔗糖脱脂奶，真空冷冻干燥24h，获得新城疫弱毒苗O‑2′‑羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖纳米粒缓释剂。