[发明专利]一种同时检测猪肺炎支原体、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的三重PCR方法

摘要

本发明公开了一种同时检测猪肺炎支原体、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的三重PCR方法。本发明首先筛选出具有该病原体基因型特点的保守性基因片段，作为PCR检测的三个基因靶点，分别合成扩增这些靶点基因的引物；然后将3个基因片段的3对引物放在一个PCR反应体系，建立直接从样品中一次检测三种病原体的三重PCR检测方法。本发明一方面既可以准确检测病原体，还可以对混合感染状况进行分析，从而掌握其疫情流行发展趋势，起到一箭双雕的效果。另一方面其较常规PCR方法缩短了24小时的检测时间，达到了快速检测实际样品的目的，并降低了成本。

主权项

一种同时检测猪肺炎支原体、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的三重PCR方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)筛选具有猪肺炎支原体、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌三个病原体基因型特点的保守性基因片段，作为PCR检测的三个基因靶点，分别合成扩增上述靶点基因的引物；(2)将3对引物放在一个PCR反应体系中，扩增靶点基因；(3)通过琼脂糖凝胶电泳检测鉴定PCR扩增产物；其中：扩增猪肺炎支原体的上游引物的序列如SEQ ID NO.1所示；下游引物的序列如SEQ ID NO.2所示；扩增猪多杀性巴氏杆菌的上游引物的序列如SEQ ID NO.3所示；下游引物的序列如SEQ ID NO.4所示；扩增副猪嗜血杆菌的上游引物的序列如SEQ ID NO.5所示；下游引物的序列如SEQ ID NO.6所示。