[发明专利]一种用于检测猪瘟病毒的重组抗原的制备方法在审
| 申请号： | 201410494375.8 | 申请日： | 2014-09-24 |
| 公开（公告）号： | CN104313037A | 公开（公告）日： | 2015-01-28 |
| 发明（设计）人： | 吴晓杰 | 申请（专利权）人： | 杭州诺威泰克生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/40 | 分类号： | C12N15/40;C12N15/70;C07K14/08;G01N33/569 |
| 代理公司： | 杭州裕阳专利事务所(普通合伙) 33221 | 代理人： | 冯燕青 |
| 地址： | 311188 浙江省杭州市钱*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用于检测猪瘟病毒的重组抗原的制备方法，一种用于检测猪瘟病毒的重组抗原的制备方法，包括如下步骤：基因合成，构建重组表达载体，含有猪瘟病毒E2重组蛋白的表达，将重组表达质粒转化至大肠杆菌中，进行诱导表达，诱导之后，收集菌体；含有猪瘟病毒E2重组蛋白的纯化及复性。本发明提供的用于检测猪瘟病毒的重组抗原的制备方法，对猪瘟病毒主要抗原表位所在的E2全片段进行重组表达,这样就保留了全部E2的抗原决定簇位点,进而有效的避免了假阴性即漏检现象；具有生产周期短,产量高,成本低的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 猪瘟 病毒 重组 抗原 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种用于检测猪瘟病毒的重组抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 步骤a，基因合成，设计引物进行PCR反应，得到猪瘟病毒的E2基因序列如SEQ ID No：1所示； 步骤b，构建重组表达载体，步骤a中的基因序列测序成功后，将该基因序列用限制性内切酶进行双酶切之后，插入到用相同两个酶切处理的质粒表达载体中； 步骤c，合有猪瘟病毒E2重组蛋白的表达，将步骤b中的重组表达质粒转化至大肠杆菌中，进行诱导表达，诱导之后，收集菌体； 步骤d，合有猪瘟病毒E2重组蛋白的纯化及复性，将步骤c收集的菌体破碎提取重组蛋白，然后进行纯化及复性，得到重组蛋白氨基酸序列如SEQ ID No：28所示。
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