[发明专利]一种用于检测猪瘟病毒的重组抗原的制备方法

权利要求书

1.一种用于检测猪瘟病毒的重组抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 

步骤a，基因合成，设计引物进行PCR反应，得到猪瘟病毒的E2基因序列如SEQ ID No：1所示； 

步骤b，构建重组表达载体，步骤a中的基因序列测序成功后，将该基因序列用限制性内切酶进行双酶切之后，插入到用相同两个酶切处理的质粒表达载体中； 

步骤c，合有猪瘟病毒E2重组蛋白的表达，将步骤b中的重组表达质粒转化至大肠杆菌中，进行诱导表达，诱导之后，收集菌体； 

步骤d，合有猪瘟病毒E2重组蛋白的纯化及复性，将步骤c收集的菌体破碎提取重组蛋白，然后进行纯化及复性，得到重组蛋白氨基酸序列如SEQ ID No：28所示。 

2.根据权利要求1所述的用于检测猪瘟病毒的重组抗原的制备方法，其特征在于， 

步骤a中，设计引物如下： 

CSFV-1u：ATGCAGCTAGCCTGCAAGGAAGATTACAGGTACGCAATATCATCAACCAATGAGATA 

CSFV-1d：ATTCTTTCCAGGTGGTGGTGAGACCTCCGGCCCCGAGTAGCCCTATCTCATTGGTTGA 

CSFV-2u：CCACCTGGAAAGAATACAACCACGATTTGCAACTGAATGACGGGACCGTTAAGGCCATT 

CSFV-2d：TGACCACATTAAGTGCTGTGACTTTAAAGGAACCTGCCACGCAAATGGCCTTAACGGT 

CSFV-3u：CACTTAATGTGGTCAGTAGGAGGTATTTGGCATCATTGCATAAGGAGGCTTCACTCACT 

CSFV-3d：GAGGCTTCACTCACTTCCGTGACATTTGAGCTCCTGTTCGACGGGACCAACCCATCAAC 

CSFV-4u：CAAATGGGCACAGCCCGAACCCGAAGTCATCTCCCATTTCCTCAGTTGATGGGTTGGTC 

CSFV-4d：CAAGGTTGTGTTGTACTTTCCCTTGACAACAGGACTCGTATCAAATGGGCACAGCC 

CSFV-5u：TACAACACAACCTTGTTGAACGGTAGTGCTTACTATCTTGTCTGTCCAATAGGGTGGAC 

CSFV-5d：TTCTCAGAGTTGTTGGGCTCACTGCTGTGCACTCTATAACACCCGTCCACCCTATTGGA 

CSFV-6u：CAACAACTCTGAGAACAGAAGTGGTAAAGACCTTCAGGAGGGACAAGCCCTTTCCGCAC 

CSFV-6d：AATAAATCTTCATTTTCCACTGTTGTGGTCACACAATCCATTCTGTGCGGAAAGGGCTT 

CSFV-7u：AATGAAGATTTATTCTACTGTAAGTTGGGGGGCAACTGGACATGTGTGAAAGGTGAACC 

CSFV-7d：CACACCATCTGCATTGTTTTACTAGCCCCCCCGTGTAGACCACTGGTTCACCTTTCACA 

CSFV-8u：AATGCAGATGGTGTGGCTTTGACTTCAATGAGCCTGACGGACTCCCACACTACCCCATA 

CSFV-8d：TCCACTATTCTGTAACCTGTCTCATTTGCCAAAATGCACTTACCTATGGGGTAGTGTGG 

CSFV-9u：TTACAGAATAGTGGATTCAACAGACTGTAACAGAGATGGTGTCGTAATCAGCACAGAGG 

CSFV-9d：ATGCACCTTGACAGTTGTGTTACCGATCAAGCACTCATGACTCCCCTCTGTGCTGATTA 

CSFV-10u：ACTGTCAAGGTGCATGCATCAGATGAAAGACTGGGCCCCATGCCATGCAGACCTAAAG 

CSFV-10d：TGTACAGGAAGTTTTCCTTACAGGTCCTGCACTAGAGACGATCTCTTTAGGTCTGCATG 

CSFV-11u：AAAACTTCCTGTACATTCAACTACGCAAAAACTTTGAAGAACAAGTACTATGAGCCCAG 

CSFV-11d：ACTGATACTCGCCCTTAAGCATATATTGCTGGAAGTAGCTGTCCCTGGGCTCATAGTAC 

CSFV-12u：AAGGGCGAGTATCAGTACTGGTTTGACCTGGACGTGACTGACCGCCACTCAGATTACTT 

CSFV-12d：TTCCTCCTAACAGTGCTACCACCACCAAGACAACAAATTCTGCGAAGTAATCTGAGTGG 

CSFV-13u：CACTGTTAGGAGGAAGATATGTCCTGTGGCTAATAGTGACCTACATAGTTTTAACAGA 

CSFV-13d：ACCAGCGGCGAGTTGTTCTGTTAAAACTA， 

将引物CSFV-1u，CSFV-1，d，CSFV-2u，CSFV-2d，CSFV-3u，CSFV-3d，CSFV-4u，CSFV-4d混合，进行PCR反应，所得产物命名为CSFV-1； 

将引物CSFV-5u，CSFV-5d，CSFV-6u，CSFV-6d，CSFV-7u，CSFV-7d，CSFV-8u，CSFV-8d混合，进行PCR反应，所得产物命名为CSFV-2； 

将引物 

CSFV-9u，CSFV-9d，CSFV-10u，CSFV-10d，CSFV-11u，CSFV-11d，CSFV-12u，CSFV-12d，CSFV-13u，CSFV-13d混合，进行PCR反应，所得产物命名为CSFV-3；然后将上述三个产物 

CSFV-1，CSFV-2，CSFV-3混合作为模板进行PCR反应，得到猪瘟病毒的E2基因序列如SEQ ID No：1所示。