[发明专利]一种矮牵牛染色体的制片方法

摘要

本发明公开了一种矮牵牛染色体的制片方法，该方法为：于晴天早晨8:00-10:00取矮牵牛幼蕾，先置于0.002mol.L^-18-羟基喹啉水溶液进行低温预处理，再转入卡诺氏固定液固定，经0.075mol.L^-1氯化钾低渗，接着在1mol.L^-1HCl溶液60℃水浴解离，冲洗后蒸馏水低渗，醋酸洋红染色液染色。将幼蕾移入载玻片，切取雌蕊柱头部位，制片、镜检。本发明方法确定了不同倍性矮牵牛最佳取样时花蕾大小、预处理方法、解离及染色的方法和时间以及制片流程，获得的染色体分散均匀，易于计数或进行核型分析，具有操作简单方便效率高的优点，具有较好的应用前景。

主权项

一种矮牵牛染色体的制片方法，其特征在于，该方法包括如下步骤： （1）于晴天早晨8:00‑10:00取二倍体、四倍体矮牵牛长度分别为3~6mm和5~8mm的不包含萼片的幼蕾；（2）分别将二、四倍体矮牵牛幼蕾分开放置于0.002mol.L^‑1 8‑羟基喹啉水溶液中2‑6℃低温避光预处理3小时，蒸馏水冲洗3‑5次吸水纸吸干水后转入卡诺氏固定液固定12‑24小时，经体积浓度95%、体积浓度80%乙醇依次冲洗然后转入体积浓度70%乙醇中4℃保存备用；（3）将步骤（2）中备用的幼蕾先用蒸馏水冲洗3‑5次，再用吸水纸吸干水，再经0.075mol.L^‑1氯化钾溶液进行低渗10分钟，在1 mol.L‑1HCl溶液60℃水浴解离5分钟，蒸馏水冲洗3‑5次后蒸馏水低渗30分钟，吸水纸吸干水；（4）转入体积百分浓度为45%的醋酸溶液配制的质量浓度为1%的洋红染色液中，在2‑6℃低温下染色12‑24小时；（5）用镊子分别将二、四倍体矮牵牛幼蕾移入载玻片上，用刀片切取雌蕊中的柱头部位去除其余部位，用另外一块载玻片十字交叉覆盖，用力按压不可移动，分开两载玻片，在两片载玻片上材料处分别滴上1‑2滴1%洋红染色液，垂直覆上盖玻片，用吸水纸吸去溢出盖玻片外多余洋红染色液；在盖玻片上覆盖5‑6层吸水纸，一手压紧吸水纸，另一手用铅笔尾端垂直均匀敲击盖玻片直至材料呈现雾状分散开，，再用拇指垂直用力按压玻片10秒，按压时盖玻片不能移动，玻片置于酒精灯外焰来回晃动拷片1‑2秒；先在低倍镜下找出处于有丝分裂中期分裂相细胞，在100×10倍油镜下进行染色体计数和显微照相。