[发明专利]一种矮牵牛染色体的制片方法

权利要求书

1.一种矮牵牛染色体的制片方法，其特征在于，该方法包括如下步骤： 

（1）于晴天早晨8:00-10:00取二倍体、四倍体矮牵牛长度分别为3~6mm和5~8mm的不包含萼片的幼蕾；

（2）分别将二、四倍体矮牵牛幼蕾分开放置于0.002mol.L^-1 8-羟基喹啉水溶液中2-6℃低温避光预处理3小时，蒸馏水冲洗3-5次吸水纸吸干水后转入卡诺氏固定液固定12-24小时，经体积浓度95%、体积浓度80%乙醇依次冲洗然后转入体积浓度70%乙醇中4℃保存备用；

（3）将步骤（2）中备用的幼蕾先用蒸馏水冲洗3-5次，再用吸水纸吸干水，再经0.075mol.L^-1氯化钾溶液进行低渗10分钟，在1 mol.L-1HCl溶液60℃水浴解离5分钟，蒸馏水冲洗3-5次后蒸馏水低渗30分钟，吸水纸吸干水；

（4）转入体积百分浓度为45%的醋酸溶液配制的质量浓度为1%的洋红染色液中，在2-6℃低温下染色12-24小时；

（5）用镊子分别将二、四倍体矮牵牛幼蕾移入载玻片上，用刀片切取雌蕊中的柱头部位去除其余部位，用另外一块载玻片十字交叉覆盖，用力按压不可移动，分开两载玻片，在两片载玻片上材料处分别滴上1-2滴1%洋红染色液，垂直覆上盖玻片，用吸水纸吸去溢出盖玻片外多余洋红染色液；在盖玻片上覆盖5-6层吸水纸，一手压紧吸水纸，另一手用铅笔尾端垂直均匀敲击盖玻片直至材料呈现雾状分散开，，再用拇指垂直用力按压玻片10秒，按压时盖玻片不能移动，玻片置于酒精灯外焰来回晃动拷片1-2秒；先在低倍镜下找出处于有丝分裂中期分裂相细胞，在100×10倍油镜下进行染色体计数和显微照相。

2.根据权利要求1所述的一种矮牵牛染色体的制片方法，其特征在于，步骤（2）中所述卡诺氏固定液是由无水乙醇和冰醋酸按体积比3:1制成的。

3.根据权利要求1所述的一种矮牵牛染色体的制片方法，其特征在于，步骤（4）中所述45%（体积百分浓度）醋酸溶液配制的1%（质量浓度）洋红染色液配制方法为：先加入45ml乙酸再加水55ml混匀得到100ml体积浓度为 45%醋酸溶液，然后将洋红粉末1克缓慢倒入上述醋酸溶液中，边煮边搅拌，过滤后的滤液即为得到质量浓度为1%的洋红染色液。

4.根据权利要求3所述的一种矮牵牛染色体的制片方法，其特征在于，在质量浓度为1%的洋红染色液煮沸冷却后加质量浓度为4%的铁明矾溶液1~2滴，过滤后即可。