[发明专利]一种His标签包涵体蛋白纯化方法在审
| 申请号： | 201410448675.2 | 申请日： | 2014-09-04 |
| 公开（公告）号： | CN104211752A | 公开（公告）日： | 2014-12-17 |
| 发明（设计）人： | 孙艳;吕茂杰;杨保收;盛长忠;梁武 | 申请（专利权）人： | 天津瑞普生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K1/14 | 分类号： | C07K1/14;C07K1/16;C07K1/113 |
| 代理公司： | 天津滨海科纬知识产权代理有限公司 12211 | 代理人： | 韩敏 |
| 地址： | 300308 天津市滨海新区空港经济区*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种His标签包涵体蛋白的纯化方法。本发明以N-十二烷基肌氨酸钠为变性剂，以碱性PH的CAPS(N-环己基-3-氨基丙磺酸)为缓冲液，裂解包涵体蛋白。N-十二烷基肌氨酸钠为一种表面活性剂，通过破坏蛋白内的疏水键溶解包涵体蛋白，变性条件较为温和。该变性方法的最大特点是，避免了尿素易分解产生异氰酸盐导致蛋白多肽链的自由氨基甲酰化的缺陷，溶解蛋白经Ni-NTA柱纯化效果优于尿素，蛋白溶解后即具有生物活性，无需做复性处理。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 his 标签 包涵 蛋白 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种His标签包涵体蛋白的纯化方法，其特征在于包括以下步骤1)取待纯化的包涵体，先用包涵体洗涤液对其进行洗涤，再用PBS对其进行洗涤；2)取包涵体裂解液，对步骤1)洗涤完毕的包涵体进行溶解，室温震荡，充分溶解后离心收集上清；3)利用Ni‑NET柱对步骤2)得到的上清液进行纯化，过程中利用洗液洗脱杂蛋白，利用洗脱液洗脱目的蛋白，而后利用透析缓冲液对洗脱的目的蛋白进行透析；上述包涵体裂解液是其中具有50～100mM CAPS，0.1‑1％N‑十二烷基肌氨酸钠的溶液，其pH为8.0～9.0。
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