[发明专利]一种His标签包涵体蛋白纯化方法在审
| 申请号： | 201410448675.2 | 申请日： | 2014-09-04 |
| 公开（公告）号： | CN104211752A | 公开（公告）日： | 2014-12-17 |
| 发明（设计）人： | 孙艳;吕茂杰;杨保收;盛长忠;梁武 | 申请（专利权）人： | 天津瑞普生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K1/14 | 分类号： | C07K1/14;C07K1/16;C07K1/113 |
| 代理公司： | 天津滨海科纬知识产权代理有限公司 12211 | 代理人： | 韩敏 |
| 地址： | 300308 天津市滨海新区空港经济区*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 his 标签 包涵 蛋白 纯化 方法 | ||
1.一种His标签包涵体蛋白的纯化方法，其特征在于包括以下步骤
1)取待纯化的包涵体，先用包涵体洗涤液对其进行洗涤，再用PBS对其进行洗涤；
2)取包涵体裂解液，对步骤1)洗涤完毕的包涵体进行溶解，室温震荡，充分溶解后离心收集上清；
3)利用Ni-NET柱对步骤2)得到的上清液进行纯化，过程中利用洗液洗脱杂蛋白，利用洗脱液洗脱目的蛋白，而后利用透析缓冲液对洗脱的目的蛋白进行透析；
上述包涵体裂解液是其中具有50～100mM CAPS，0.1-1％N-十二烷基肌氨酸钠的溶液，其pH为8.0～9.0。
2.根据权利要求1所述一种His标签包涵体蛋白的纯化方法，其特征在于：
所述透析缓冲液是其中具有50～100mM NaH2PO4，400～500mM Tris的溶液，其pH为8.0～9.0；
所述洗液是其中具有50～100mM NaH2PO4，10～50mM Tris-Cl，5-10mM咪唑的溶液，其pH为7.5～8.5；
所述洗液是其中具有50～100mM NaH2PO4，10～50mM Tris-Cl，100-300mM咪唑的溶液，其pH为7.5～8.5。
3.根据权利要求1所述一种His标签包涵体蛋白的纯化方法，其特征在于步骤1)所述的包涵体洗涤液是其中具有20mM Tris-Cl，1％Triton X-100的溶液，其PH为8.0～9.0。
4.根据权利要求1所述一种His标签包涵体蛋白的纯化方法，其特征在于步骤1)利用包涵体洗涤液对包涵体洗涤的次数为2～3次。
5.根据权利要求1所述一种His标签包涵体蛋白的纯化方法，其特征在于步骤1)利用PBS对包涵体洗涤的次数为2～3次。
6.一种His标签包涵体蛋白的裂解液，其特征在于其中具有50～100mM CAPS，0.1-1％N-十二烷基肌氨酸钠，且其pH为8.0～9.0。
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