[发明专利]一种多肽提取与分离方法

摘要

本发明涉及一种多肽提取与分离方法。本发明以大尺寸的二氧化硅（亚毫米级）共价负载聚乙撑亚胺作为吸附剂(SiO2@PEI)，在不同的pH环境下能提取等电点不同的多肽，而降低pH则多肽可被高效释放。这是由于该吸附剂易质子化而呈阳离子性，而多肽随pH降低可由带负电变成带正电，因此与吸附剂间由静电互补吸附变成静电互斥而释放。吸附剂与多肽间的络合常数一般都高于1012M-1,因此即使含量在亚飞摩尔级的痕量多肽也可被提取。同时，对绝大多数多肽，释放率达到79-92%。该吸附剂至少能提取相对丰度仅为0.1%的多肽。该吸附剂制备简单，能反复使用。

主权项

一种多肽提取与分离方法，其特征在于具体步骤如下：对于单一多肽的吸附与释放(1.1)配置浓度为1×10‑2摩尔/升~1×10‑8摩尔/升的多肽的缓冲水溶液，控制缓冲水溶液pH值大于多肽的等电点pI，然后向所得溶液中加入吸附剂SiO2@PEI，并进行紫外/可见光谱的时间检测，随着时间加长，吸光度越来越低，直到吸光度不发生变化，即认为达到了吸附平衡；(1.2)将上述吸附了多肽的吸附剂SiO2@PEI过滤，并采用新鲜的缓冲水溶液洗涤，所述缓冲水溶液与步骤(1.1)所述的缓冲水溶液的pH值相同，然后该吸附剂SiO2@PEI所吸附的多肽用另一缓冲水溶液洗脱回收，所述另一缓冲水溶液pH值小于多肽的等电点pI，并继续进行紫外/可见光谱的时间检测，直到紫外/可见光吸收不发生变化；即认为达到了释放平衡；对于特定多肽的提取与纯化由于特定多肽具有确定的等电点pI, 因此先将吸附剂SiO2@PEI加入到含有目标提取多肽和干扰多肽的缓冲水溶液中，控制缓冲水溶液中的pH值大于目标提取多肽的等电点pI；经过1~48小时孵化，将吸附剂SiO2@PEI分离并在该pH值下采用新鲜的缓冲水溶液洗涤，该吸附剂SiO2@PEI所吸附的多肽以另一pH值低于pI的缓冲水溶液洗脱回收，该过程采用高效液相色谱或基质辅助激光解吸/离子化时间谱进行检测；基于等电点差异的提取方法通过切换pH值即可提取各类目标多肽，完全满足常规的分离要求，洗脱后的吸附剂可再利用。