[发明专利]鹿猪马驴牛羊动物骨组织的PCR鉴定用引物体系

摘要

本发明公开了一种鹿猪马驴牛羊动物骨组织的PCR鉴定用引物及基于该引物的鉴定方法和试剂盒，引物体系可一次检测多达六个物种动物骨cDNA，且引物均仅对各自物种目标片段特异性扩增，适用于一次PCR反应中导入多种引物对的多重PCR，有效缩短实验时间；本发明从骨组织中提取总RNA，经逆转录将总RNA转为cDNA，以该cDNA为鉴定PCR模板，缩短了从骨组织中提取总DNA并脱钙的时间，提高了检测鉴定效率，且进行PCR时使用优化特定PCR反应体系及程序，采用统一检测方法，建立了快速高效且特异性高的鉴定方式，从而有效鉴定鹿骨生物制品的真伪及掺假情况；此外该引物体系制成的试剂盒方便使用，可进行工业化生产及应用。

主权项

一种鹿猪马驴牛羊动物骨组织的PCR鉴定用引物，其特征在于：由下列引物对组成：(1)对鹿线粒体12S rRNA基因进行扩增生成鹿特异性扩增片段的引物对Ⅰ：正向引物：5’‑CAGCCTTCCTATTGACCCTTAAT‑3’反向引物：5’‑CGGCTGTAAAGTTACTTTCGTTG‑3’；(2)对猪线粒体12S rRNA基因进行扩增生成猪特异性扩增片段的引物对II：正向引物：5’‑GCACACCTATAACGGTAGCTCAT‑3’反向引物：5’‑TCCTAGCTATCGTGTGTCAGGAT‑3’；(3)对马线粒体16S rRNA基因进行扩增生成马特异性扩增片段的引物对III：正向引物：5’‑CAAGCTCAACGACACATCTATC‑3’反向引物：5’‑CCCTGAAGGTTAAGGTTTGTG‑3’；(4)对驴线粒体16S rRNA基因进行扩增生成驴特异性扩增片段的引物对IV：正向引物：5’‑CAAGCTCAACGTCACACATATC‑3’反向引物：5’‑CCTGTGTTGGGTTAACAATAGTC‑3’；(5)对牛线粒体细胞色素b基因进行扩增生成牛特异性扩增片段的引物对V：正向引物：5’‑GGCCCTCTTACTAATTCTAGCT‑3’反向引物：5’‑CCGATGGTGATATATGGGTGTT‑3’；(6)对羊线粒体细胞色素b基因进行扩增生成羊特异性扩增片段的引物对VI：正向引物：5’‑GGTGCTATCCTACTAATCCTCAT‑3’反向引物：5’‑GAGGAGGGGTATAATTACTAGGA‑3’。