[发明专利]鹿猪马驴牛羊动物骨组织的PCR鉴定用引物体系

权利要求书

1.一种鹿猪马驴牛羊动物骨组织的PCR鉴定用引物，其特征在于：由下列引物对组成：

(1)对鹿线粒体12S rRNA基因进行扩增生成鹿特异性扩增片段的引物对Ⅰ：

正向引物：5’-CAGCCTTCCTATTGACCCTTAAT-3’

反向引物：5’-CGGCTGTAAAGTTACTTTCGTTG-3’；

(2)对猪线粒体12S rRNA基因进行扩增生成猪特异性扩增片段的引物对II：

正向引物：5’-GCACACCTATAACGGTAGCTCAT-3’

反向引物：5’-TCCTAGCTATCGTGTGTCAGGAT-3’；

(3)对马线粒体16S rRNA基因进行扩增生成马特异性扩增片段的引物对III：

正向引物：5’-CAAGCTCAACGACACATCTATC-3’

反向引物：5’-CCCTGAAGGTTAAGGTTTGTG-3’；

(4)对驴线粒体16S rRNA基因进行扩增生成驴特异性扩增片段的引物对IV：

正向引物：5’-CAAGCTCAACGTCACACATATC-3’

反向引物：5’-CCTGTGTTGGGTTAACAATAGTC-3’；

(5)对牛线粒体细胞色素b基因进行扩增生成牛特异性扩增片段的引物对V：

正向引物：5’-GGCCCTCTTACTAATTCTAGCT-3’

反向引物：5’-CCGATGGTGATATATGGGTGTT-3’；

(6)对羊线粒体细胞色素b基因进行扩增生成羊特异性扩增片段的引物对VI：

正向引物：5’-GGTGCTATCCTACTAATCCTCAT-3’

反向引物：5’-GAGGAGGGGTATAATTACTAGGA-3’。

2.基于权利要求1所述鹿猪马驴牛羊动物骨组织的PCR鉴定用引物的鉴定方法，其特征在于：从动物骨样品中抽提总RNA，经逆转录为cDNA，以cDNA作为模板，利用所述引物对Ⅰ、引物对Ⅱ、引物对Ⅲ、引物对Ⅳ、引物对Ⅴ和引物对Ⅵ分别进行PCR扩增实验，反应结束后根据琼脂糖凝胶电泳判定结果；所述样品cDNA模板来自鹿、猪、马、驴、牛、羊物种动物骨组织的混合，或上述各物种动物骨组织产品中的一种。

3.根据权利要求2所述基于鹿猪马驴牛羊动物骨组织的PCR鉴定用引物的鉴定方法，其特征在于：所述PCR扩增实验中的特定PCR反应体系包括下列组分：双蒸水4.9体积份、10×PCR反应缓冲液1体积份、2mM each的dNTPs1体积份、2.5U/μL的热启动高效Taq酶0.1体积份、经稀释20倍的cDNA模板1体积份、2μM正向引物1体积份和2μM反向引物1体积份。

4.根据权利要求3所述基于鹿猪马驴牛羊动物骨组织的PCR鉴定用引物的鉴定方法，其特征在于：所述PCR扩增实验中的特定PCR反应体系包括下列组分：双蒸水4.9μL、10×PCR反应缓冲液1μL、2mM each的dNTPs1μL、2.5U/μL的热启动高效Taq酶0.1μL、经稀释20倍的cDNA模板1μL、2μM正向引物1μL和2μM反向引物1μL。

5.根据权利要求2所述基于鹿猪马驴牛羊动物骨组织的PCR鉴定用引物的鉴定方法，其特征在于：所述PCR扩增实验中特定PCR反应程序为：依次进行94℃下预变性2min，94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸1min，进行30次循环，72℃下延伸10min，最后在4℃下保持1min后结束。

6.根据权利要求2至5中任一权利要求所述基于鹿猪马驴牛羊动物骨组织的PCR鉴定用引物的鉴定方法，其特征在于：所述琼脂糖凝胶电泳结束后判定结果时，判定依据为所述引物对Ⅰ、引物对Ⅱ、引物对Ⅲ、引物对Ⅳ、引物对Ⅴ和引物对Ⅵ分别扩增出的DNA片段大小；其中

鹿物种的引物对Ⅰ扩增出的DNA片段大小为376bp；

猪物种的引物对Ⅱ扩增出的DNA片段大小为300bp；

马物种的引物对Ⅲ扩增出的DNA片段大小为586bp；

驴物种的引物对Ⅳ扩增出的DNA片段大小为232bp；

牛物种的引物对Ⅴ扩增出的DNA片段大小为360bp；

羊物种的引物对Ⅵ扩增出的DNA片段大小为231bp。