[发明专利]一种集样PCR检测HBV的试剂盒及应用

摘要

本发明公开了一种集样PCR检测HBV的试剂盒及应用。本发明提供了一种鉴定或辅助鉴定多个待测样本中哪些感染乙型肝炎病毒的试剂盒，包括单独使用的引物对A、单独使用的引物对B和记载PCR扩增方法的载体。本发明的实验证明，通过集样法(样品合并处理方法)对HBV流行病学调查中所采集样品进行PCR检测，尤其是在阳性率不高的情况下，可减少样品处理时间和步骤，且节省试剂开支。

主权项

一种鉴定或辅助鉴定多个待测样本中哪些样本感染乙型肝炎病毒的试剂盒，包括单独使用的引物对A、单独使用的引物对B和记载PCR扩增方法的载体；或包括含有所述引物对A的PCR试剂、含有所述引物对B的PCR试剂和所述记载PCR扩增方法的载体；所述引物对A由序列表序列1所示的单链DNA和序列表序列2所示的单链DNA组成；所述引物对B由序列表序列3所示的单链DNA和序列表序列4所示的单链DNA组成；所述PCR扩增方法包括如下步骤：1)将多个待测样本分为n组，且将每组中各待测样本等质量混合得到混合样本，每组待测样本数相同，提取每组所述混合样本的基因组DNA；2)以每组所述混合样本的基因组DNA为模板，用所述引物对A进行第一次PCR扩增，得到第一次PCR扩增产物；3)以所述第一次PCR扩增产物为模板，用所述引物对B进行第二次PCR扩增，得到每组待测样本的第二次PCR扩增产物；检测每组待测样本的第二次PCR扩增产物，选取PCR扩增产物具有大小为281bp片段的待测样本组；检测每组待测样本的第二次PCR扩增产物的方法为电泳检测；4)将所述PCR扩增产物具有大小为281bp片段的待测样本组中的每个待测样本分别提取基因组DNA，分别重复步骤2)和3)，得到每个待测样本的第二次PCR扩增产物；检测每个待测样本的第二次PCR扩增产物，若第二次PCR扩增产物具有大小为281bp片段，则该待测样本感染或候选感染HBV病毒；若第二次PCR扩增产物不具有大小为281bp片段，则该待测样本未感染或候选未感染HBV病毒。