[发明专利]一种利用柱孢霉属真菌菌株制备壳二孢氯素的方法

摘要

本发明公开了一种利用柱孢霉属真菌菌株制备壳二孢氯素的方法。本发明所利用的菌株是柱孢霉属真菌NCC3746（Cylindrocarponsp.），保藏编号为CGMCCNo.7756。本发明提供的制备壳二孢氯素的方法，壳二孢氯素的发酵单位达到了1600mg/L以上，高于目前已见报道的壳二孢氯素的发酵单位，并开发了简便易行的结晶纯化工艺，收率60%以上，产品纯度达到97.0%以上，可以用于壳二孢氯素的工业化生产。

主权项

一种利用柱孢霉属真菌菌株制备壳二孢氯素的方法，包括以下步骤：a、制备柱孢霉属真菌NCC3746的种子液：将菌株NCC3746的斜面培养物或孢子液接种于种子培养基，22‑30 ℃、转速100‑220 rpm培养48‑72 h获得种子液；其中所述的种子培养基按以下方法制得：玉米淀粉10.0‑30.0克、葡萄糖10.0‑30.0克、热榨黄豆饼粉0.5‑2.0克、麦芽粉3.0‑6.0克、酵母粉1.0‑3.0克、氯化钠0.5‑2.0克、七水硫酸镁0.5‑2.0克，加水定容至1000 mL，pH6.5‑7.0，121℃灭菌30min；b、制备柱孢霉属真菌NCC3746的发酵液：将上述种子液以体积百分比3‑10 %的接种量接种于发酵培养基，在摇瓶或发酵罐中发酵，发酵温度22 ‑30 ℃、发酵时间120‑180 h，得到发酵液； 其中所述的发酵培养基按以下方法制得：葡萄糖20.0‑40.0克、可溶性淀粉20.0‑40.0克、热榨黄豆饼粉4.0‑20.0克、棉籽粉4.0‑20.0克、磷酸钾1.0‑10.0克、氯化钠0.5‑2.0克、七水硫酸镁0.5‑2.0克，加自来水定容至1000 mL，pH6.5‑7.0，121℃灭菌30 min；c、将上述发酵液离心10‑20 min，弃去上清液，获得菌丝体；d、用有机溶剂水溶液对菌丝体浸提2‑4次，每次2‑4小时，弃去第一次浸提液，合并之后浸提液，减压浓缩，除去有机溶剂，得到浓缩液；e、浓缩液加入甲醇，溶解，得溶液；f、将上述溶液静置，析出结晶，待晶体析出完全后，过滤除去母液，得到壳二孢氯素粗品；g、将壳二孢氯素粗品加入甲醇和丙酮的混合溶剂中溶解，静置重结晶，待结晶完全后，滤除母液，得到壳二孢氯素纯品；其中步骤d所述的有机溶剂水溶液为乙醇水溶液或丙酮水溶液；其中步骤g中甲醇和丙酮的体积比为1:1至3:1。