[发明专利]一种利用柱孢霉属真菌菌株制备壳二孢氯素的方法

权利要求书

1.一种利用柱孢霉属真菌菌株制备壳二孢氯素的方法，包括以下步骤：

a、制备柱孢霉属真菌NCC3746的种子液：

将菌株NCC3746的斜面培养物或孢子液接种于种子培养基，22-30 ℃、转速100-220 rpm培养48-72 h获得种子液；

其中所述的种子培养基按以下方法制得：玉米淀粉10.0-30.0克、葡萄糖10.0-30.0克、热榨黄豆饼粉0.5-2.0克、麦芽粉3.0-6.0克、酵母粉1.0-3.0克、氯化钠0.5-2.0克、七水硫酸镁0.5-2.0克，加水定容至1000 mL，pH6.5-7.0，121℃灭菌30min；

b、制备柱孢霉属真菌NCC3746的发酵液：

将上述种子液以体积百分比3-10 %的接种量接种于发酵培养基，在摇瓶或发酵罐中发酵，发酵温度22 -30 ℃、发酵时间120-180 h，得到发酵液；

其中所述的发酵培养基按以下方法制得：葡萄糖20.0-40.0克、可溶性淀粉20.0-40.0克、热榨黄豆饼粉4.0-20.0克、棉籽粉4.0-20.0克、磷酸钾1.0-10.0克、氯化钠0.5-2.0克、七水硫酸镁0.5-2.0克，加自来水定容至1000 mL，pH6.5-7.0，121℃灭菌30 min；

c、将上述发酵液离心10-20 min，弃去上清液，获得菌丝体；

d、用有机溶剂水溶液对菌丝体浸提2-4次，每次2-4小时，弃去第一次浸提液，合并之后浸提液，减压浓缩，除去有机溶剂，得到浓缩液；

e、浓缩液加入甲醇，溶解，得溶液；

f、将上述溶液静置，析出结晶，待晶体析出完全后，过滤除去母液，得到壳二孢氯素粗品；

g、将壳二孢氯素粗品加入甲醇和丙酮的混合溶剂中溶解，静置重结晶，待结晶完全后，滤除母液，得到壳二孢氯素纯品；

其中步骤d所述的有机溶剂水溶液为乙醇水溶液或丙酮水溶液；

其中步骤g中甲醇和丙酮的体积比为1:1至3:1。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤d中第一次浸提用有机溶剂水溶液的体积百分浓度为30-60%，之后浸提用有机溶剂水溶液的体积百分浓度为90-100%。

3.根据权利要求1所述的方法，其中步骤d所述的减压浓缩在30-50 ℃进行。

4.根据权利要求1所述的方法，其中步骤f、g中所述的结晶，壳二孢氯素浓度在90-130 mg/mL。

5.根据权利要求1所述的方法，其中步骤f、g中所述的结晶，温度为室温10-25℃，结晶时间在24-48 h之间。

6.根据权利要求1所述的方法，其中步骤e、g中所述的溶解为超声溶解或加热溶解，加热温度在40-50 ℃。

7.根据权利要求1所述的方法，其中步骤b中所述的摇瓶发酵，其转速为100-220 rpm。

8.根据权利要求1所述的方法，其中步骤b中所述的发酵罐发酵，其罐压为0.05±0.01 Mpa、通气量为10-30 L/min，搅拌速度为400-500 rpm。